LncPrep+96kb 2.2kb对小鼠卵巢颗粒细胞雌激素分泌的调节研究

发布时间：2021-04-25 09:28

　　目的:LncPrep+96kb是一种新发现的长链非编码RNA,有两个转录本分别为2.2kb和2.8kb,表达于卵巢颗粒细胞中,但其在卵巢的功能尚不清楚。本课题将探究lncPrep+96kb 2.2kb在小鼠卵巢颗粒细胞的作用和可能的机制。方法:通过原位杂交实验,探究lncPrep+96kb在小鼠卵巢的时空表达情况。分离培养原代颗粒细胞,转染lncPrep+96kb 2.2kb过表达质粒和敲除质粒,CCK-8检测lncPrep+96kb 2.2kb对细胞增殖的影响;收集培养基,通过放射免疫法检测雌激素分泌量的变化;实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测芳香化酶的表达变化。通过RNA免疫共沉淀法鉴定lncPrep+96kb 2.2kb的特异性结合蛋白。通过生物信息学技术预测lncPrep+96kb 2.2kb与特异性结合蛋白EDF1的结合位点。突变结合位点,观察是否可以逆转lncPrep+96kb 2.2kb对颗粒细胞雌激素合成及芳香化酶表达的影响。结果:原位杂交实验发现lncPrep+96kb主要表达于小鼠卵巢初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞中,随着卵泡发育,表达减少。LncPrep+96kb 2... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 卵巢卵泡发育过程
    1.2 雌激素的合成与调控
    1.3 LncRNA在卵巢的研究
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 试剂调配
    2.2 实验方法
        2.2.1 原位杂交
        2.2.2 CRISPER/cas9 基因敲除质粒构建
        2.2.3 过表达载体及突变质粒的构建
        2.2.4 原代颗粒细胞分离培养
        2.2.5 中抽质粒
        2.2.6 原代颗粒细胞质粒转染
        2.2.7 细胞活力检测
        2.2.8 激素检测
        2.2.9 实时荧光定量PCR
        2.2.10 蛋白印迹
        2.2.11 免疫共沉淀
        2.2.12 细胞免疫荧光
        2.2.13 数据分析
第3章 实验结果
    3.1 LncPrep+96kb在小鼠卵巢时空特异性表达
    3.2 LncPrep+96kb对颗粒细胞增殖无影响
    3.3 LncPrep+96kb2.2kb减少了雌激素的合成并抑制芳香化酶的表达
    3.4 LncPrep+96kb 2.2kb与EDF1 结合并诱导 EDF1 易位
    3.5 干扰EDF1 下调了芳香化酶的表达和抑制了雌激素的分泌
    3.6 LncPrep+96kb的1979-2077 位点是EDF1 的主要结合位点
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 进一步工作的方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]脯氨酰寡肽酶对颗粒细胞孕酮合成的影响[J]. 张亚琼,李嘉恒,王艺舒,匡渤海,张春平.  南昌大学学报(理科版). 2017(05)
[2]转录因子EB与帕金森病[J]. 郝新梅,李玉娟.  中国药理学通报. 2017(03)



本文编号：3159145