高通量测序技术挖掘NMJ发育与再生相关新型调控分子研究

发布时间：2021-04-25 14:35

　　神经肌肉接头（NMJ）是一种外周胆碱能化学突触,主要由三种细胞组成:运动神经元,肌纤维和雪旺氏胶质细胞。NMJ发育和损伤后修复的过程是一个复杂且精细的多分子参与调控过程。为研究NMJ发育、成熟和再生过程中基因的表达变化,本课题建立了三种研究模型:（1）C2C12肌细胞分化成肌管细胞和AGRIN蛋白刺激肌管细胞模拟突触后膜形成ACHR聚集簇的模型;（2）生理状态下,新生和成年小鼠膈肌表面NMJ突触区和非突触区发育的模型;（3）小鼠臂丛神经去支配损伤后的肌肉组织的NMJ损伤修复再生模型。基于这三种模型,利用Illumina深度测序法,对三种模型的基因表达水平进行差异统计和比对分析。对统计结果进行质量评估,发现样品的Clean reads、测序饱和度和mRNA打断的随机程度都符合要求。对符合要求的统计结果进行比对,并且对差异基因进行Gene Ontology和KEGG pathway分析。根据上述分析,对差异基因的细胞组成、参与的生物过程、发挥的分子功能和主要参与的信号通路进行了统计。统计发现各个样品中差异基因主要细胞组成是细胞膜、细胞器和胞外基质等;主要参与的生物过程是细胞基础代谢、细胞黏... 

【文章来源】：青岛科技大学山东省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词
第一章 前言
    1.1 神经肌肉接头（NMJ）
        1.1.1 NMJ的基本概念
        1.1.2 NMJ发育初期
        1.1.3 NMJ的成熟及其调控过程
    1.2 深度测序
        1.2.1 深度测序的基本概念
        1.2.2 转录组的深度测序
        1.2.3 深度测序结果
        1.2.4 测序数据及处理方法
        1.2.5 深度测序数据分析方法
    1.3 研究的目的与意义
第二章 NMJ发育与再生相关实验模型的建立
    2.1 建立C2C12细胞诱导分化和ACHR聚集体外模型
        2.1.1 材料与方法
        2.1.2 实验结果
    2.2 不同发育阶段小鼠膈肌NMJ模型的建立
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 建立实验模型
    2.3 建立小鼠臂丛神经去神经支配损伤与再生模型
        2.3.1 实验材料
        2.3.2 建立实验模型
第三章 利用深度测序方法挖掘NMJ发育与再生相关基因
    3.1 实验操作方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 主要实验方法
        3.1.3 深度测序
    3.2 实验结果
        3.2.1 样本总RNA提取质量
        3.2.2 测序质量评估
        3.2.3 差异基因数目统计
        3.2.4 差异基因GO分析
        3.2.5 差异基因的KEGG pathway分析
第四章 NMJ发育和再生相关潜在重要基因的挖掘
    4.1 乙酰胆碱受体，乙酰胆碱酯酶和Musk基因的表达差异
    4.2 WNT和TGF-β信号的表达差异基因
    4.3 MicroRNA表达差异基因
    4.4 细胞黏附信号相关表达差异基因
    4.5 细胞外基质表达差异基因
第五章 总结与展望
参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]WISP-1——开辟探究肿瘤形成发展的新途径[J]. 孙海涛,高雅,唐琼兰,文彬,蒋学风.  医学综述. 2008(15)
[2]C2C12成肌细胞体外诱导分化为肌管的实验[J]. 陈永乐,周光前,邓宇斌,智伟,谢彗琪,邓力,杨志明,王亚柱.  中山大学学报(医学科学版). 2008(01)



本文编号：3159557