PM2.5对HBE细胞癌相关基因表达及信号通路的机制研究

发布时间：2021-04-28 13:03

　　目的:研究大气细颗粒物PM2.5对人支气管上皮细胞（HBE）癌基因表达水平的影响,探讨大气细颗粒物PM2.5通过MAPK/PKC信号通路对HBE细胞癌基因表达的影响,探讨PM2.5染毒HBE细胞后蛋白质表达变化及其作用机制。方法:用10μg/mL、50μg/mL的PM2.5处理HBE细胞,设立对照组,用10μM/L Cr⁶⁺作为阳性对照,染毒HBE细胞24 h,应用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测癌基因（c-myc、c-fos、k-ras和p53）的基因和蛋白质表达水平变化;MAPK/PKC信号通路实验设立空白对照组、PM2.5实验组、抑制剂组（p38MAPK抑制剂、ERK1/2、PKCα抑制剂）、PM2.5+抑制剂组,用抑制剂预先处理HBE细胞30min,接着用无血清的DMEM培养基培养24h作为抑制剂实验组,用PM2.5染毒24h作为PM2.5实验组;用抑制剂预先处理HBE细胞30min,然后用50μg/mL的PM2.5染毒24h作为PM2.5+抑制剂实验组,应用荧光定量PCR和western blot检测p38MAPK、ERK1... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第1章 PM2.5对HBE细胞癌基因的影响
    1.1 实验材料
        1.1.1 细胞
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
        1.1.4 主要试剂及配制
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养与PM2.5处理
        1.2.2 PM2.5处理HBE细胞后目的基因表达水平的检测
        1.2.3 PM2.5处理HBE细胞后目的蛋白表达水平的检测
        1.2.4 数据统计分析
    1.3 结果
        1.3.1 Q-PCR条件探索及标准曲线的建立
        1.3.2 PM2.5对目的基因表达水平的影响
        1.3.3 PM2.5对目的蛋白表达水平的影响
    1.4 讨论
第2章 信号通路对HBE细胞癌基因表达的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 只要试剂及配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与处理
        2.2.2 引物的合成
        2.2.3 引物扩增效率及特异性的验证
        2.2.4 Q-PCR检测信号通路相关基因表达水平
        2.2.5 Western blot检测信号通路相关蛋白表达水平
    2.3 结果
        2.3.1 Q-PCR条件探索及标准曲线的建立
        2.3.2 PM2.5对细胞信号通路基因表达的影响
        2.3.3 PM2.5对细胞信号通路蛋白表达的影响
        2.3.4 p38MAPK抑制剂对目的基因表达水平的改变
        2.3.5 ERK1/2抑制剂对目的基因表达水平的改变
        2.3.6 PKCα抑制剂对目的基因表达水平的改变
    2.4 讨论
第3章 PM2.5对HBE细胞的蛋白质表达谱研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 主要试剂及配置
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养与处理
        3.2.2 样品预处理
        3.2.3 酶切
        3.2.4 TMT标记和分组
        3.2.5 分组分
        3.2.6 样品上机检测
        3.2.7 差异蛋白的KEGG和 GO分析
        3.2.8 生物信息学软件分析
    3.3 结果
        3.3.1 差异表达蛋白的筛选
        3.3.2 KEGG分析差异蛋白
        3.3.3 GO富集分析差异蛋白
        3.3.4 差异蛋白的venny图分析
        3.3.5 WGCNA分析
    3.4 讨论
结论
参考文献
文献综述 PM2.5 暴露致肺癌的相关基因和蛋白质改变及其分子机制
    参考文献
主要英文缩略语索引
作者攻读学位期间的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白质组学及其在法医病理学中的应用[J]. 韩刘君,徐红梅,陈龙.  法医学杂志. 2019(01)
[2]虎杖苷通过p38 MAPK/Nrf2/HO-1通路减轻小鼠哮喘模型气道炎症[J]. 赵雨喆,姜京植,叶晶,李燕,李俊峰,延光海,李良昌,朴红梅.  中国药理学通报. 2018(06)
[3]基于数据挖掘分析PTGER3在肠型胃癌中的表达及临床意义[J]. 张昱,陈颖,徐红.  现代肿瘤医学. 2018(11)
[4]2009～2013年江苏省淮安市肺癌发病和死亡分析[J]. 孙中明,张芹,潘恩春,缪丹丹,何源.  中国肿瘤. 2018(01)
[5]氧化应激在PM2.5诱导人支气管上皮细胞增殖中的作用[J]. 凌敏,梁婕,石根勇,俞萍,陆罗定,赵荣,卞倩.  江苏预防医学. 2017(06)
[6]2010-2014年江西省肿瘤登记地区肺癌发病率及时间趋势分析[J]. 熊小玲,刘杰,朱丽萍,徐艳,颜玮,陈轶英,魏清风.  中华疾病控制杂志. 2017(10)
[7]PM2.5对人肺癌细胞A549迁移、侵袭能力的增强作用[J]. 杨丹,周伟强,杨彪,肖纯凌.  生态毒理学报. 2017(05)
[8]PM2.5暴露对肺癌细胞A549自噬和凋亡的影响[J]. 任妮娜,林宜光,林子英,刘刚.  实用医学杂志. 2017(16)
[9]内质网应激相关因子PERK和ATF6在结肠癌中的表达及意义[J]. 高磊,冯丹丹,戴发亮,董仕桢,吴玉丹,轩青霞,陈攀,金建军,高强.  安徽医科大学学报. 2017(09)
[10]PM2.5引起炎性反应与氧化应激的研究现状[J]. 曹璇,陈静瑶,陈宇,王珍霞.  吉林医学. 2016(12)

博士论文
[1]ATF6在小鼠胚胎植入期子宫和卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用研究[D]. 熊永洁.西北农林科技大学 2017
[2]OLC1基因在吸烟致癌过程中相关作用机制的研究[D]. 陈文挺.北京协和医学院 2016
[3]肺瘤平膏调控NF-κB相关炎性信号通路防止肺癌转移的分子机制研究[D]. 陈赐慧.北京中医药大学 2013



本文编号：3165525