双生病毒C4与NbSKη的结合能力决定C4诱发的症状
发布时间：2021-05-24 04:53
双生病毒（Geminivirus）是世界范围内广泛发生的植物单链DNA病毒,并在作物上造成严重的危害。双生病毒的C4能诱发产生病毒症状。本研究用三种双生病毒为对象,包括云南番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Yunnan virus,TLCYnV）、中国番茄黄曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl China Virus,TYLCCNV）以及烟草曲茎病毒（Tobacco curly shoot virus,TbCSV）,研究了不同双生病毒编码的C4蛋白诱导症状差异的分子机制。通过马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）异源表达系统表达三种双生病毒的C4蛋白,证明了不同双生病毒编码的C4蛋白诱导产生症状有所差异。利用酵母双杂交技术以及共表达激光共聚焦技术证明了C4蛋白诱导产生症状的差异与C4蛋白和NbSKη相互作用能力紧密相关,TLCYnV C4与NbSKη互作能力最强并且诱导产生严重症状。证实了TLCYnV C4的微型结构域（第28-37位氨基酸）对于C4与NbSKη相互作用至关重要,将TLCYnV C4的微型结构域替换至TYLCCNV C4和...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 双生病毒的研究进展
1.1.1 双生病毒发展史
1.1.2 双生病毒的危害及其经济重要性
1.1.3 双生病毒分类及代表种介绍
1.1.3.1 双生病毒分类
1.1.3.2 云南番茄曲叶病毒
1.1.3.3 中国番茄黄曲叶病毒
1.1.3.4 烟草曲茎病毒
1.2 双生病毒致病相关因子及致病机理
1.2.1 C4/AC4
1.2.1.1 抑制植物RNA沉默
1.2.1.2 诱导植物病毒病症状
1.2.1.3 抵抗宿主免疫反应
1.2.1.4 影响细胞间信号通路
1.2.2 C2/AC2(L2/AL2)
1.2.3 βC1
1.2.4 BV1
1.2.5 BC1
1.3 SHAGGY/GSK3-like激酶的研究进展
1.4 本研究的研究目的及研究意义
2 实验材料与方法
2.1 实验设备
2.2 常规实验方法
2.2.1 DNA分子克隆相关实验技术
2.2.2 PCR产物纯化或者割胶酶切回收目的片段
2.2.3 碱裂解法提取大肠杆菌质粒
2.2.4 限制性内切酶酶切反应
2.2.5 载体去磷酸化
2.2.6 连接
2.2.7 同源重组
2.2.8 大肠杆菌感受态细胞热击转化
2.2.9 重组DNA分子电击农杆菌
2.2.10 接种工作
2.2.11 CTAB法大量提取植物基因组总DNA
2.2.12 植物小量提取蛋白质
2.2.13 蛋白的SDS-PAGE及 Western-blot杂交
2.2.14 酵母双杂交技术
2.2.15 原核表达蛋白及纯化
3 双生病毒C4诱导症状差异的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 Renaturedblotoverlayassay
3.1.2.2 Proteinbindingassay
3.1.2.3 间接ELISA
3.1.2.4 亚细胞结构分离试验(Subcellular Fractionation Assay)
3.1.2.5 侵染性克隆的构建方法
3.1.2.6 流式细胞分析(Flowcytometricanalysis)
3.1.2.7 地高辛标记Southern-blot印迹杂交
3.2 结果与分析
3.2.1 不同双生病毒C4诱导症状具有差异性
3.2.2 不同双生病毒C4 与本氏烟寄主因子NbSKη互作能力不同
3.2.3 不同双生病毒C4 对改变NbSKη亚细胞定位能力不同
3.2.4 不同双生病毒C4 蛋白与NbSKη蛋白体外结合能力不同
3.2.5 TLCYnVC4第28-37 位氨基酸(Minidomain)是影响C4与NbSKη互作的关键结构域
3.2.6 TLCYnVC4-Minidomain突变体能够改变NbSKη的亚细胞定位
3.2.7 与NbSKη互作的野生型C4 及重组型C4 突变体具有使NbSKη核定位信号转移至细胞膜的能力
3.2.8 PVX表达含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒C4加重病毒侵染症状
3.2.9 PVX表达含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒C4促进细胞分裂进程
3.2.10 含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒侵染性克隆增强病毒侵染力
3.3 讨论
4 全文小结
参考文献
附录 A 常用缓冲液及培养基配方
附录 B 论文中所用术语缩写及中英文对照
附录 C 论文中病毒缩写及中英文对照
【参考文献】：
期刊论文
[1]Science Letters:Expression of a begomoviral DNAβ gene in transgenic Nicotiana plants induced abnormal cell division[J]. 崔晓峰,李云琴,胡东维,周雪平. Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
[2]Interaction between a Nanovirus-like Component and the Tobacco Curly Shoot Virus/Satellite Complex[J]. Pei-Jun WU Xue-Ping ZHOU~* Institute of Biotechnology Zhejiang University,Hangzhou 310029,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(01)
[3]AC2 and AC4 proteins of Tomato yellow leaf curl China virus and Tobacco curly shoot virus mediate suppression of RNA silencing[J]. CUI Xiaofeng & ZHOU Xueping Institute of Biotechnology,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China. Chinese Science Bulletin. 2004(24)
[4]Identification of a nanovirus-like DNA molecule associated with Tobacco curly shoot virus isolates containing satellite DNA[J]. XIE Yan*, WU Peijun*, TAO Xiaorong and ZHOU Xueping**(Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China). Progress in Natural Science. 2004(08)
本文编号：3203589
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 双生病毒的研究进展
1.1.1 双生病毒发展史
1.1.2 双生病毒的危害及其经济重要性
1.1.3 双生病毒分类及代表种介绍
1.1.3.1 双生病毒分类
1.1.3.2 云南番茄曲叶病毒
1.1.3.3 中国番茄黄曲叶病毒
1.1.3.4 烟草曲茎病毒
1.2 双生病毒致病相关因子及致病机理
1.2.1 C4/AC4
1.2.1.1 抑制植物RNA沉默
1.2.1.2 诱导植物病毒病症状
1.2.1.3 抵抗宿主免疫反应
1.2.1.4 影响细胞间信号通路
1.2.2 C2/AC2(L2/AL2)
1.2.3 βC1
1.2.4 BV1
1.2.5 BC1
1.3 SHAGGY/GSK3-like激酶的研究进展
1.4 本研究的研究目的及研究意义
2 实验材料与方法
2.1 实验设备
2.2 常规实验方法
2.2.1 DNA分子克隆相关实验技术
2.2.2 PCR产物纯化或者割胶酶切回收目的片段
2.2.3 碱裂解法提取大肠杆菌质粒
2.2.4 限制性内切酶酶切反应
2.2.5 载体去磷酸化
2.2.6 连接
2.2.7 同源重组
2.2.8 大肠杆菌感受态细胞热击转化
2.2.9 重组DNA分子电击农杆菌
2.2.10 接种工作
2.2.11 CTAB法大量提取植物基因组总DNA
2.2.12 植物小量提取蛋白质
2.2.13 蛋白的SDS-PAGE及 Western-blot杂交
2.2.14 酵母双杂交技术
2.2.15 原核表达蛋白及纯化
3 双生病毒C4诱导症状差异的研究
3.1 材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.1.2.1 Renaturedblotoverlayassay
3.1.2.2 Proteinbindingassay
3.1.2.3 间接ELISA
3.1.2.4 亚细胞结构分离试验(Subcellular Fractionation Assay)
3.1.2.5 侵染性克隆的构建方法
3.1.2.6 流式细胞分析(Flowcytometricanalysis)
3.1.2.7 地高辛标记Southern-blot印迹杂交
3.2 结果与分析
3.2.1 不同双生病毒C4诱导症状具有差异性
3.2.2 不同双生病毒C4 与本氏烟寄主因子NbSKη互作能力不同
3.2.3 不同双生病毒C4 对改变NbSKη亚细胞定位能力不同
3.2.4 不同双生病毒C4 蛋白与NbSKη蛋白体外结合能力不同
3.2.5 TLCYnVC4第28-37 位氨基酸(Minidomain)是影响C4与NbSKη互作的关键结构域
3.2.6 TLCYnVC4-Minidomain突变体能够改变NbSKη的亚细胞定位
3.2.7 与NbSKη互作的野生型C4 及重组型C4 突变体具有使NbSKη核定位信号转移至细胞膜的能力
3.2.8 PVX表达含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒C4加重病毒侵染症状
3.2.9 PVX表达含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒C4促进细胞分裂进程
3.2.10 含有TLCYnVC4-Minidomain的重组型双生病毒侵染性克隆增强病毒侵染力
3.3 讨论
4 全文小结
参考文献
附录 A 常用缓冲液及培养基配方
附录 B 论文中所用术语缩写及中英文对照
附录 C 论文中病毒缩写及中英文对照
【参考文献】：
期刊论文
[1]Science Letters:Expression of a begomoviral DNAβ gene in transgenic Nicotiana plants induced abnormal cell division[J]. 崔晓峰,李云琴,胡东维,周雪平. Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
[2]Interaction between a Nanovirus-like Component and the Tobacco Curly Shoot Virus/Satellite Complex[J]. Pei-Jun WU Xue-Ping ZHOU~* Institute of Biotechnology Zhejiang University,Hangzhou 310029,China. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(01)
[3]AC2 and AC4 proteins of Tomato yellow leaf curl China virus and Tobacco curly shoot virus mediate suppression of RNA silencing[J]. CUI Xiaofeng & ZHOU Xueping Institute of Biotechnology,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China. Chinese Science Bulletin. 2004(24)
[4]Identification of a nanovirus-like DNA molecule associated with Tobacco curly shoot virus isolates containing satellite DNA[J]. XIE Yan*, WU Peijun*, TAO Xiaorong and ZHOU Xueping**(Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China). Progress in Natural Science. 2004(08)
本文编号：3203589
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