海葡萄（Caulerpa lentillifera）多糖的结构和生物活性的研究
发布时间：2021-05-24 19:30
海葡萄,学名为长茎葡萄蕨藻（Caulerpa lentillifera）,隶属于绿藻门（Chlorophyta）、羽藻目（Bryopsidales）、蕨藻科（Caulerpaceae）。本文以选自越南芽庄的海葡萄为研究对象,提取分离其多糖成分,采用化学和波谱学的方法对其结构进行分析,并对其活性进行评价,研究结果如下:干燥脱盐的海葡萄在80℃下超纯水提取3 h,使用75%无水乙醇进行沉淀。粗多糖产率为5.04%,粗多糖脱蛋白后经强阴离子交换柱层析和凝胶渗透柱层析纯化后得到多糖组分CP0-1。理化性质分析表明CP0-1的总糖含量为61.1%;蛋白含量为9.5%;硫酸基含量为11%。单糖组成主要由甘露糖、半乳糖和木糖组成,比例为4.4:4.0:1.4。根据理化性质与单糖组成的结果分析,推测CP0-1是硫酸化的木糖半乳甘露聚糖,分子量为471 kDa。对多糖CP0-1通过逐级降解、脱硫和甲基化分析其结构,确定CP0-1以→4)-Manp-（1→为主链结构,3位可能存在分支;硫酸基团主要存在→2）-Manp-（1→的3位。半乳糖主要集中在支链上,以→3）-Galp-(1→为主,其6位存在硫酸基团...
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 绿藻的研究现状
1.2 绿藻多糖的结构研究
1.2.1 石莼多糖
1.2.2 硫酸化半乳聚糖
1.2.3 硫酸化甘露聚糖
1.2.4 硫酸化鼠李聚糖
1.2.5 硫酸化阿拉伯聚糖
1.3 绿藻多糖的生物活性
1.3.1 抗凝血活性
1.3.2 免疫调节活性
1.3.3 抗病毒活性
1.3.4 抗氧化活性
1.4 立项背景及研究意义
第二章 海葡萄多糖分离纯化以及理化性质
2.1 实验试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 海葡萄多糖的提取
2.2.2 海葡萄多糖除蛋白质
2.2.3 海葡萄多糖的分离纯化
2.2.3.1 阴离子交换柱层析
2.2.3.2 凝胶渗透柱层析
2.2.4 海葡萄多糖纯度分析以及分子量的测定
2.2.5 海葡萄多糖的理化性质分析
2.2.5.1 总糖含量的测定
2.2.5.2 蛋白质含量的测定
2.2.5.3 糖醛酸含量的测定
2.2.5.4 硫酸基含量的测定
2.2.6 单糖组成分析
2.2.6.1 多糖完全酸水解
2.2.6.2 样品及混合标准品的PMP柱前衍生物制备
2.2.6.3 高效液相色谱分析
2.3 结果与分析
2.3.1 海葡萄多糖的提取
2.3.2 海葡萄多糖的分离纯化
2.3.2.1 阴离子交换柱层析
2.3.2.2 凝胶渗透柱层析
2.3.3 分子量及纯度分析
2.3.4 理化性质分析
2.3.5 单糖组成分析
2.4 小结
第三章 海葡萄多糖的结构鉴定和不同分子量多糖的制备
3.1 实验试剂及仪器
3.1.1 实验试剂
3.1.2 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 红外光谱分析
3.2.2 海葡萄多糖的主侧链组成分析
3.2.3 海葡萄多糖脱硫酸基
3.2.3.1 试剂的脱水处理
3.2.3.2 多糖吡啶盐的制备
3.2.3.3 多糖的脱硫酸基反应
3.2.4 多糖的甲基化分析
3.2.4.1 试剂及样品的预处理
3.2.4.2 甲基化反应
3.2.4.3 甲基化多糖的水解
3.2.4.4 水解产物的还原
3.2.4.5 还原产物的乙酰化
3.2.4.6 GC-MS分析
3.2.5 多糖的氧化降解
3.3 结果与分析
3.3.1 红外光谱分析
3.3.2 CP0-1的主、侧链组成分析
3.3.3 CP0-1的甲基化分析
3.3.4 海葡萄多糖氧化降解产物分子量及纯度分析
3.4 小结
第四章 海葡萄多糖的活性评价
4.1 实验试剂及仪器
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 体外抗凝血活性研究
4.2.1.1 家兔心脏取血
4.2.1.2 凝血酶原时间(PT)的测定
4.2.1.3 凝血酶时间(TT)的测定
4.2.1.4 活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定
4.2.1.5 凝血因子FⅡa和 FⅩa试验
4.2.2 免疫调节及抗氧化活性
4.2.2.1 免疫抑制小鼠的模型建立及给药
4.2.2.2 多糖对免疫器官的影响
4.2.2.3 多糖对小鼠免疫因子的影响
4.2.2.4 多糖对小鼠体内抗氧化指标的影响
4.2.3 抗病毒活性
4.3 结果与分析
4.3.1 抗凝血活性分析
4.3.1.1 体外抗凝血活性评价
4.3.1.2 抗凝血因子结果分析
4.3.2 免疫调节活性
4.3.2.1 多糖对免疫器官的影响
4.3.2.2 多糖对小鼠免疫因子的影响
4.3.2.3 多糖对小鼠体内抗氧化指标的影响
4.3.3 抗病毒活性
4.4 小结
总结
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]Structural and immunogenomic insights into B-cell receptor activation[J]. Yangyang Feng,Yu Wang,Shaocun Zhang,Kabeer Haneef,Wanli Liu. Journal of Genetics and Genomics. 2020(01)
[2]南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L过氧化氢酶的热胁迫响应[J]. 袁保生,赵霞,刘晨临,张培玉. 海洋学报. 2019(09)
[3]石莼（Ulva lactuca L.）营养成分及多糖组成分析[J]. 林月,沈照鹏,宗雯雯,崔欣,江晓路. 食品工业科技. 2019(17)
[4]一种刺松藻来源的硫酸阿拉伯聚糖的制备及特征结构表征[J]. 金鑫,嵇国利,赵小亮,李国云,于广利. 高等学校化学学报. 2019(04)
[5]海洋蕨藻的生物地理分布·生物学特性以及生物入侵[J]. 刘瑞,李永梅,王艺晓,丁兰平,黄冰心,杨楠,陈彦伟. 安徽农业科学. 2019(04)
[6]松藻主要生物活性物质研究进展[J]. 胡月,彭雍博,张雪楠,王俊鑫,何云海,汪秋宽. 水产科学. 2019(01)
[7]几种海藻粗多糖的理化性质及结构特征分析[J]. 侯萍,马军,陈燕,裴志胜,赵静,叶细鹏,姜芳燕,黄海. 热带海洋学报. 2018(02)
[8]多糖对免疫系统调控的研究进展[J]. 汤小芳,刘想,胡美华,张贤益,李文娟. 食品工业科技. 2018(09)
[9]沙蚕（Perinereis aibuhitensis）硫酸多糖的结构表征及抗凝血活性研究[J]. 刘潇潇,刘丽丽,赵小亮,李国云,蔡超,于广利. 中国海洋药物. 2016(06)
[10]多糖的免疫调节作用研究进展[J]. 张典,高兴春,姜凤良,弥曼. 中国老年学杂志. 2016(21)
博士论文
[1]几种大型海藻硫酸多糖免疫相关活性及转录组学研究[D]. 宋琳.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2016
[2]瑞香素对小鼠淋巴细胞免疫抑制效果及其作用机制的研究[D]. 宋博翠.吉林大学 2014
[3]浒苔多糖的结构及寡糖研究[D]. 齐晓辉.中国海洋大学 2012
[4]四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究[D]. 陈荫.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]东海乌参（Acaudina leucoprocta）多糖的结构鉴定及活性研究[D]. 周德健.浙江海洋大学 2019
[2]缘管浒苔（Enteromorpha）的营养成分及安全性分析[D]. 段元慧.大连海洋大学 2014
[3]天然多糖体外抗氧化活性研究[D]. 彭钦.天津大学 2014
[4]四种绿藻多糖的提取分离及其结构与抗凝活性研究[D]. 冯以明.中国海洋大学 2012
[5]羽藻和缘管浒苔提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究[D]. 商飞.中国海洋大学 2011
[6]刺松藻（Codium fragile （Suringar） Hariot）多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究[D]. 嵇国利.中国海洋大学 2010
本文编号：3204738
【文章来源】：浙江海洋大学浙江省
【文章页数】：105 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 绿藻的研究现状
1.2 绿藻多糖的结构研究
1.2.1 石莼多糖
1.2.2 硫酸化半乳聚糖
1.2.3 硫酸化甘露聚糖
1.2.4 硫酸化鼠李聚糖
1.2.5 硫酸化阿拉伯聚糖
1.3 绿藻多糖的生物活性
1.3.1 抗凝血活性
1.3.2 免疫调节活性
1.3.3 抗病毒活性
1.3.4 抗氧化活性
1.4 立项背景及研究意义
第二章 海葡萄多糖分离纯化以及理化性质
2.1 实验试剂及仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 海葡萄多糖的提取
2.2.2 海葡萄多糖除蛋白质
2.2.3 海葡萄多糖的分离纯化
2.2.3.1 阴离子交换柱层析
2.2.3.2 凝胶渗透柱层析
2.2.4 海葡萄多糖纯度分析以及分子量的测定
2.2.5 海葡萄多糖的理化性质分析
2.2.5.1 总糖含量的测定
2.2.5.2 蛋白质含量的测定
2.2.5.3 糖醛酸含量的测定
2.2.5.4 硫酸基含量的测定
2.2.6 单糖组成分析
2.2.6.1 多糖完全酸水解
2.2.6.2 样品及混合标准品的PMP柱前衍生物制备
2.2.6.3 高效液相色谱分析
2.3 结果与分析
2.3.1 海葡萄多糖的提取
2.3.2 海葡萄多糖的分离纯化
2.3.2.1 阴离子交换柱层析
2.3.2.2 凝胶渗透柱层析
2.3.3 分子量及纯度分析
2.3.4 理化性质分析
2.3.5 单糖组成分析
2.4 小结
第三章 海葡萄多糖的结构鉴定和不同分子量多糖的制备
3.1 实验试剂及仪器
3.1.1 实验试剂
3.1.2 实验仪器
3.2 实验方法
3.2.1 红外光谱分析
3.2.2 海葡萄多糖的主侧链组成分析
3.2.3 海葡萄多糖脱硫酸基
3.2.3.1 试剂的脱水处理
3.2.3.2 多糖吡啶盐的制备
3.2.3.3 多糖的脱硫酸基反应
3.2.4 多糖的甲基化分析
3.2.4.1 试剂及样品的预处理
3.2.4.2 甲基化反应
3.2.4.3 甲基化多糖的水解
3.2.4.4 水解产物的还原
3.2.4.5 还原产物的乙酰化
3.2.4.6 GC-MS分析
3.2.5 多糖的氧化降解
3.3 结果与分析
3.3.1 红外光谱分析
3.3.2 CP0-1的主、侧链组成分析
3.3.3 CP0-1的甲基化分析
3.3.4 海葡萄多糖氧化降解产物分子量及纯度分析
3.4 小结
第四章 海葡萄多糖的活性评价
4.1 实验试剂及仪器
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 体外抗凝血活性研究
4.2.1.1 家兔心脏取血
4.2.1.2 凝血酶原时间(PT)的测定
4.2.1.3 凝血酶时间(TT)的测定
4.2.1.4 活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定
4.2.1.5 凝血因子FⅡa和 FⅩa试验
4.2.2 免疫调节及抗氧化活性
4.2.2.1 免疫抑制小鼠的模型建立及给药
4.2.2.2 多糖对免疫器官的影响
4.2.2.3 多糖对小鼠免疫因子的影响
4.2.2.4 多糖对小鼠体内抗氧化指标的影响
4.2.3 抗病毒活性
4.3 结果与分析
4.3.1 抗凝血活性分析
4.3.1.1 体外抗凝血活性评价
4.3.1.2 抗凝血因子结果分析
4.3.2 免疫调节活性
4.3.2.1 多糖对免疫器官的影响
4.3.2.2 多糖对小鼠免疫因子的影响
4.3.2.3 多糖对小鼠体内抗氧化指标的影响
4.3.3 抗病毒活性
4.4 小结
总结
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文及研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]Structural and immunogenomic insights into B-cell receptor activation[J]. Yangyang Feng,Yu Wang,Shaocun Zhang,Kabeer Haneef,Wanli Liu. Journal of Genetics and Genomics. 2020(01)
[2]南极冰藻Chlamydomonas sp. ICE-L过氧化氢酶的热胁迫响应[J]. 袁保生,赵霞,刘晨临,张培玉. 海洋学报. 2019(09)
[3]石莼（Ulva lactuca L.）营养成分及多糖组成分析[J]. 林月,沈照鹏,宗雯雯,崔欣,江晓路. 食品工业科技. 2019(17)
[4]一种刺松藻来源的硫酸阿拉伯聚糖的制备及特征结构表征[J]. 金鑫,嵇国利,赵小亮,李国云,于广利. 高等学校化学学报. 2019(04)
[5]海洋蕨藻的生物地理分布·生物学特性以及生物入侵[J]. 刘瑞,李永梅,王艺晓,丁兰平,黄冰心,杨楠,陈彦伟. 安徽农业科学. 2019(04)
[6]松藻主要生物活性物质研究进展[J]. 胡月,彭雍博,张雪楠,王俊鑫,何云海,汪秋宽. 水产科学. 2019(01)
[7]几种海藻粗多糖的理化性质及结构特征分析[J]. 侯萍,马军,陈燕,裴志胜,赵静,叶细鹏,姜芳燕,黄海. 热带海洋学报. 2018(02)
[8]多糖对免疫系统调控的研究进展[J]. 汤小芳,刘想,胡美华,张贤益,李文娟. 食品工业科技. 2018(09)
[9]沙蚕（Perinereis aibuhitensis）硫酸多糖的结构表征及抗凝血活性研究[J]. 刘潇潇,刘丽丽,赵小亮,李国云,蔡超,于广利. 中国海洋药物. 2016(06)
[10]多糖的免疫调节作用研究进展[J]. 张典,高兴春,姜凤良,弥曼. 中国老年学杂志. 2016(21)
博士论文
[1]几种大型海藻硫酸多糖免疫相关活性及转录组学研究[D]. 宋琳.中国科学院大学(中国科学院海洋研究所) 2016
[2]瑞香素对小鼠淋巴细胞免疫抑制效果及其作用机制的研究[D]. 宋博翠.吉林大学 2014
[3]浒苔多糖的结构及寡糖研究[D]. 齐晓辉.中国海洋大学 2012
[4]四株不同来源海洋微生物胞外多糖的结构及抗氧化活性研究[D]. 陈荫.中国海洋大学 2012
硕士论文
[1]东海乌参（Acaudina leucoprocta）多糖的结构鉴定及活性研究[D]. 周德健.浙江海洋大学 2019
[2]缘管浒苔（Enteromorpha）的营养成分及安全性分析[D]. 段元慧.大连海洋大学 2014
[3]天然多糖体外抗氧化活性研究[D]. 彭钦.天津大学 2014
[4]四种绿藻多糖的提取分离及其结构与抗凝活性研究[D]. 冯以明.中国海洋大学 2012
[5]羽藻和缘管浒苔提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究[D]. 商飞.中国海洋大学 2011
[6]刺松藻（Codium fragile （Suringar） Hariot）多糖的提取分离、结构表征及其抗凝活性研究[D]. 嵇国利.中国海洋大学 2010
本文编号：3204738
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3204738.html
