拟南芥转录因子MYB94和MYB96抑制体细胞“脱分化”的机制研究

发布时间:2021-06-27 16:29
  植物细胞具有全能性,在离体培养条件下可通过“脱分化”和“再分化”两个过程实现植株再生。植物细胞经历“脱分化”后多数形成愈伤组织,进而获得再生植株的能力,因此愈伤组织形成是植株再生的关键步骤。一些愈伤组织形成调控因子(如Auxin Response Factor 7(ARF7))得到鉴定。然而,目前愈伤组织形成调控网络还不够清晰,更多新的调控因子还有待鉴定。MYB转录因子作为最大的转录因子家族之一,广泛参与植物生长发育及逆境胁迫响应,但是其在愈伤组织形成中的功能却鲜有报道。本论文通过对拟南芥不同阶段的离体培养材料表达谱芯片的分析,筛选得到两个特异性在愈伤组织中高表达的MYB家族转录因子基因MYB94及其同源基因MYB96,并对二者在愈伤组织形成中的功能和机制进行了研究。主要研究结果和结论如下:1.MYB94和MYB96抑制愈伤组织的起始和发育愈伤组织的形成包含起始和发育两个步骤,为了探究MYB94与MYB96对愈伤组织形成不同阶段的影响,利用5-Ethyny1-2’-deoxyuridine(EdU)染色观察、组织透明观察、基因功能回补实验等研究发现,myb94与myb96外植体在CIM... 

【文章来源】:山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:76 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

拟南芥转录因子MYB94和MYB96抑制体细胞“脱分化”的机制研究


图2-1?BP和LR反应原理示意图??Fig.2-1?BP?and?LR?reaction??

突变体,愈伤组织,功能冗余


士学位论文???A/raW与My596表达检测。??3.2Mra料和MEB96抑制愈伤组织形成且功能冗余??为了探宄和_9(5在愈伤组织形成过程中的功能,首先分别获得了??二者的T-DNA插入突变体和并利用植株杂交的方法获得了双突??变体?(图?3-2A)。对?Col-O、—69(5?及?m_y£>9(5?中?MF594??与M7S96的表达进行检测发现,及m_yZ?94?中检测不到M7594的表??达,而輝砂(5及卿£>94?m_y£>9(5中检测不到MZ89(5的表达(图3-2B),表明m_y妙??w>^9(5及w^Z)94?m>>Z)9(5为敲除系突变体。??A?rryb94?myb94?rryb96?B??M^^0j ̄2^3?MCo||〇i2?^??MYB94-LP+MYB94-RP^?????MYB94M??LBb1.3+MYB94_RPpJ??nyb96?rtyb94?rr\b96?mvrq/?^5??,wrDyoM??MYB96-LP+MYB96-RP^Jj??O8760+M?YB96-RP?^lEZZS?■??图3-2?T-DNA插入突变体—694、—696及—696鉴定及其中M7594、A/Y596??表达检测??Fig.?3-2?Identification?of?T-DNA?insertion?mutants?of?myb94s?myb96?and?myb94?myb96,?and??the?expression?of?MYB94?MYB96?in?these?mutants??A.未分化与己分化愈伤组织料与_9(5表达检测;B.以拟南芥根为外植体的两步法再生体系中??

表型,恢复系,载体,愈伤组织


?山东大学硕士学位论文???圔??图3-3?Col-O、;7^94、及77^696愈伤组织形成能力鉴定??Fig.?3-3?Callus?formation?abilities?of?myb94>?myb96?and?myb94?myb96??A-D.?C〇1-0、/??少/?94、w>^96?及?根外杭体愈伤纟]L织形成能力鉴E-I.C〇1-0、w#96??及w;^96?K胚轴外植体愈伤组织形成能力鉴定。??为r进一步验证w_yW^、m^69(5及m_y696愈伤组织形成能力增强的表??型是由于Mra料和My596功能缺失导致,利用无缝克隆的方法构建了??/VoMy59t._Mr5W-GfP?载体及载体(图?3-4),分别转??化双突变体?w.v砂4?w_>^96,获得阳性植株。对?Col-0、w_y/?94、w_y69(5、m_y696、??ProMYB94::MYB94-GFP?in?myb94?myb96,?ProMYB96::MYB96-GFP?in?myh94??的根外植体愈伤组织形成能力进行鉴定,结果发现/n>96愈伤组??织形成能力较Col-0增强(图3-5A-C?),而/VoMy594.vMy59?FP及??/VoA/ra96._.?A/y596-GFP转基因将w_y69<5愈伤组织形成能力的表型恢复到??单突变体的状态(图3-5E-F)。以上结果表明,/?外料、w_yW>6及叫WW?w_y矽<5??愈伤组织形成能力增强的表型是由于M75抑或功能缺失导致。??A?ProMYB94?ProMYB96?B?MYB94-CDS?MYB96-CDS??Mb?1?><b??c?Ssf?XI??

【参考文献】:
硕士论文
[1]拟南芥器官发生及体细胞胚发生相关基因的表达模式分析[D]. 辛伟.山东大学 2009



本文编号:3253199

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