蛋白磷酸酶PP1介导的组蛋白甲基转移酶EZH2去磷酸化的机制与功能探究
发布时间：2021-07-07 15:29
EZH2（Enhancer of zeste homolog 2）作为表观遗传因子多巯蛋白抑制复合物（Polycomb Repressive Complex2,PRC2）的催化亚基,催化组蛋白H3的27号赖氨酸位残基发生三甲基化修饰（H3K27me3）,进而沉默PRC2靶基因的转录,在细胞的增殖分化以及肿瘤发生中起重要作用。EZH2的21号丝氨酸（Serine 21,S21）可被蛋白激酶AKT磷酸化,其磷酸化产物p-EZH2 S21降低EZH2与PRC2底物组蛋白H3的结合,从而减弱其组蛋白甲基转移酶活性,导致PRC2靶基因的转录去抑制（de-repression）。本研究以晶状体上皮纤维化疾病中重要过程上皮细胞的间质转化（Epithelial-Mesenchymal transition,EMT）为研究背景,探究EZH2 S21去磷酸化的机制及在晶状体上皮细胞中的基因表达调控功能。我们首先建立了TGFβ诱导兔晶状体上皮细胞NN1003A发生EMT的细胞模型,在此基础上,我们发现AKT2的特异性抑制剂能显著抑制NN1003A细胞EMT进程中p-EZH2 S21磷酸化水平上调,H3K27...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MYPT1的结构示意图（JustinA.MacDonald.etal.2018）
硕士学位论文的细胞骨架中发现的含角蛋白的中间丝蛋白。EpCAM和CK都是上皮来源循环肿瘤细胞的常用生物标志物[59,60]。Vimentin是中间丝家族蛋白的一员，广泛存在于间质细胞中，在癌细胞中表达Vimentin可促进肿瘤生长和侵袭性[61]。Vimentin的表达与N-cadherin的上调有关，既往研究表明Vimentin在乳腺癌中的过表达与的不良预后有关[62]。Twist是一种螺旋-环-螺旋蛋白，在细胞分化过程中具有转录活性，在前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞中都有Twist表达的增加[63]。此外，twist可以抑制E-cadherin并上调N-cadherin，在乳腺癌细胞中表达twist可导致对紫杉醇的耐药性[64]。除了上述EMT的生物标志物外，越来越广泛的生物标志物被用来证明EMT的发生。主要概括为三个方面：（1）EMT的细胞表面标志物；（2）EMT的细胞骨架标志物；（3）细胞外蛋白质。下表概括了EMT的生物标记物与分类情况：图1-2EMT的生物标记物（MichaelZeisberg.etal.2009）6
蛋白磷酸酶PP1介导的组蛋白甲基转移酶EZH2去磷酸化的机制和功能探究TGFβ诱导条件下Fibronectin和α-SMA的蛋白质水平上调也受到显著削弱(图1-2F,G);细胞免疫荧光实验则表明α-SMA的免疫荧光信号则在CCT128930共处理条件也不再增强(图1-2H)。以上结果指出，AKT2特异性抑制剂CCT128930能显著抑制了TGFβ诱导条件下P-EZH2S21位点磷酸化水平的上调，H3K27me3的下调以及EMT标志基因的激活。这表明AKT-EZH2-H3K27me3信号途径控制兔晶状体上皮细胞的EMT进程。图1-2CCT128930削弱TGFβ诱导条件下p-EZH2磷酸化水平上调及EMT标志基因的激活A，蛋白质免疫印迹检测CCT128930对TGFβ诱导条件下p-EZH2S21及H3K27me3的蛋白表达的影响。B,C，图A中p-EZH2S21及H3K27me3蛋白质水平的定量分析。D，qRT-PCR检测CCT128930对TGFβ诱导条件下EMT标志基因FN1与ACTA2的mRNA表达水平的影响。E，蛋白质免疫印迹检测CCT128930对TGFβ诱导条件下Fibronectin和α-SMA的蛋白表达水平的影响。F，G,图E中Fibronectin和α-SMA蛋白质水平的定量分析。H，细胞免疫荧光实验检测CCT128930对TGFβ诱导条件下α-SMA蛋白表达水平的影响。23
本文编号：3269886
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MYPT1的结构示意图（JustinA.MacDonald.etal.2018）
硕士学位论文的细胞骨架中发现的含角蛋白的中间丝蛋白。EpCAM和CK都是上皮来源循环肿瘤细胞的常用生物标志物[59,60]。Vimentin是中间丝家族蛋白的一员，广泛存在于间质细胞中，在癌细胞中表达Vimentin可促进肿瘤生长和侵袭性[61]。Vimentin的表达与N-cadherin的上调有关，既往研究表明Vimentin在乳腺癌中的过表达与的不良预后有关[62]。Twist是一种螺旋-环-螺旋蛋白，在细胞分化过程中具有转录活性，在前列腺癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞中都有Twist表达的增加[63]。此外，twist可以抑制E-cadherin并上调N-cadherin，在乳腺癌细胞中表达twist可导致对紫杉醇的耐药性[64]。除了上述EMT的生物标志物外，越来越广泛的生物标志物被用来证明EMT的发生。主要概括为三个方面：（1）EMT的细胞表面标志物；（2）EMT的细胞骨架标志物；（3）细胞外蛋白质。下表概括了EMT的生物标记物与分类情况：图1-2EMT的生物标记物（MichaelZeisberg.etal.2009）6
蛋白磷酸酶PP1介导的组蛋白甲基转移酶EZH2去磷酸化的机制和功能探究TGFβ诱导条件下Fibronectin和α-SMA的蛋白质水平上调也受到显著削弱(图1-2F,G);细胞免疫荧光实验则表明α-SMA的免疫荧光信号则在CCT128930共处理条件也不再增强(图1-2H)。以上结果指出，AKT2特异性抑制剂CCT128930能显著抑制了TGFβ诱导条件下P-EZH2S21位点磷酸化水平的上调，H3K27me3的下调以及EMT标志基因的激活。这表明AKT-EZH2-H3K27me3信号途径控制兔晶状体上皮细胞的EMT进程。图1-2CCT128930削弱TGFβ诱导条件下p-EZH2磷酸化水平上调及EMT标志基因的激活A，蛋白质免疫印迹检测CCT128930对TGFβ诱导条件下p-EZH2S21及H3K27me3的蛋白表达的影响。B,C，图A中p-EZH2S21及H3K27me3蛋白质水平的定量分析。D，qRT-PCR检测CCT128930对TGFβ诱导条件下EMT标志基因FN1与ACTA2的mRNA表达水平的影响。E，蛋白质免疫印迹检测CCT128930对TGFβ诱导条件下Fibronectin和α-SMA的蛋白表达水平的影响。F，G,图E中Fibronectin和α-SMA蛋白质水平的定量分析。H，细胞免疫荧光实验检测CCT128930对TGFβ诱导条件下α-SMA蛋白表达水平的影响。23
本文编号：3269886
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