大豆GmMYB12B2转基因株系的鉴定与分析
发布时间：2021-07-28 16:33
大豆[Glycine max（L.）Merr],富含不饱和脂肪酸、蛋白质、大豆皂苷、大豆异黄酮等营养物质,因此又被人们称为“植物肉”,在农业经济中占重要地位。大豆异黄酮属于黄酮类化合物,是大豆发育过程中次生代谢的产物。作为一种植物性雌激素,其具有丰富的营养价值,大豆异黄酮能影响蛋白质的合成、生长因子活性和激素分泌等。研究发现其药理作用丰富,如抗氧化,预防和治疗心血管疾病、更年期综合症、骨质疏松症等,是目前医疗领域研究的潜在抗癌物质。因此选育高异黄酮大豆品种对于医疗健康和经济发展都具有积极意义。研究表明大豆异黄酮的含量除由其合成分解过程中相关酶基因决定外,还受到MYB类转录因子的调控。MYB型转录因子是功能最为多样的一类转录因子,目前已有研究证实MYB转录因子参与了植物中苯丙烷次级代谢途径的调控,黄酮类代谢途径就是其分支之一。研究表明,MYB类转录因子可以正向调控大豆异黄酮的积累,但也有研究证实GmMYB39基因的过表达会抑制大豆异黄酮的合成[1]。MYB类转录因子的生物学功能广泛,其功能涉及植物生长发育、逆境胁迫以及植物次生代谢等多方面。这些先前的研究成果为GmM...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
异黄酮合成途径及苯丙烷类代谢途径分支Figure1.1Isoflavonesynthesispathwayandphenylpropanemetabolicpathwaybranch在异黄酮的合成路径中，在查尔酮还原酶（CHR）、查尔酮合酶（CHS）、
第二章GmMYB12B2转基因植株的鉴定20间。加入的一抗可回收再利用，一般不超过3次）。⑤二抗加入1×PBST溶液10或15ml，根据比例加入二抗，于摇床上轻缓震荡孵育1h，孵育完成后用1×PBST溶液洗3次，每次10min。⑥显影将处理好的膜放置在显影板上，用移液器在膜表面均匀铺上提前配置好的曝光液、放入超微弱化学发光仪中显影。2.3结果2.3.1GmMYB12B2转基因植株PAT试纸条检测PAT蛋白试纸条可快速鉴别出含有PAT/bar蛋白的样品，且检测结果明显。检测PAT/bar蛋白前，加提取缓冲液提取样品蛋白，PAT/bar蛋白溶解于缓冲液中。每条试纸两端均有吸收垫，试纸上的箭头指示插入反应管的一端。样品溶液通过试纸上的薄膜渗透并被吸入上端，在试纸条中间区域观察反应结果。对于含有PAT/bar蛋白的检测样品，检测线(TestLine)将会显色，即有指示带和检测带两条带，该结果判定为阳性结果。如果检测样品为阴性，则试纸上仅显示一条带即指示带。以未转基因的受体植株材料为阴性对照，进一步鉴定阳性植株。如图2.1所示，以未转基因的W82植株为阴性对照，PAT蛋白试纸条结果表明，检测转基因株系的单株中MYB-1，MYB-2，MYB-3植株PAT蛋白试纸条检测结果均为阳性。图2.1PAT试纸条检测GmMYB12B2转基因植株Figure2.1PATteststripdetectionofGmMYB12B2transgenicplants
第二章GmMYB12B2转基因植株的鉴定212.3.2GmMYB12B2转基因植株Southernblot检测以bar序列设计上下游引物，PTF101质粒为模板PCR扩增bar基因片段，回收纯化后制备地高辛探针。以PTF-101质粒作为阳性对照，受体材料大豆叶片总DNA为阴性对照，转基因植株叶片总DNA为杂交样品，用HindIII进行37℃过夜酶切，验证外源bar基因是否转入大豆中，Southernblot杂交结果如图2.2所示，Southern杂交中阴性对照无相应条带，而MYB-1，MYB-2，MYB-3转基因株系均出现一条条带，表明MYB-1，MYB-2，MYB-3株系均为阳性植株，表明bar基因己整合到大豆基因组当中，且是以单拷贝的形式插入。图2.2Southernblot检测转基因大豆中bar基因的整合情况Figure2.2Southernblotdetectionoftheintegrationofbargenesintransgenicsoybeans通过Southernblot杂交实验，发现材料中外源bar基因的插入方式是以单拷贝形式插入，且初步确定了这些转基因材料都为阳性植株，因此这些转基因材料可用以后续的转基因安全性实验。2.3.3GmMYB12B2转基因植株Westernblot检测本研究通过WesternBlot方法分析测定了外源bar蛋白在转基因大豆组织中的表达水平，进一步验证MYB转录因子在转基因大豆后代中的表达情况。以未转基因的W82大豆材料为阴性对照，以按一定比例稀释的bar蛋白为阳性对照，使用PAT抗体进行的Westernblot结果如图2.3显示，转基因大豆MYB-1，MYB-2，23130bp9416bp6557bp4361bp2322bp2027bp564bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国转基因大豆现状与相关法规[J]. 白韵旗,程鹏,武小霞,李文滨. 大豆科技. 2019(06)
[2]大豆豆脐中异黄酮的提取工艺优化[J]. 周文红,郭咪咪,毕艳红,王朝宇,段章群. 现代食品科技. 2020(02)
[3]大豆异黄酮对生殖细胞增殖影响的研究进展[J]. 何灵芝,覃圣,撒瑞雪,徐硕,程香,马俊贤. 现代畜牧兽医. 2019(12)
[4]ELISA在基层兽医实验室遇到的问题及解决方法[J]. 张丽燕. 中国畜禽种业. 2019(12)
[5]大豆异黄酮及其功效[J]. 郭晓晖. 新农村. 2019(12)
[6]免疫层析试纸条检测技术的研究进展[J]. 周梦婕,李小盼,代荣阳,阎锡蕴,段德民. 检验医学与临床. 2019(22)
[7]大豆异黄酮对2型糖尿病围绝经期模型大鼠氧化应激损伤的保护作用及其机制[J]. 宋娜,苏东峰,刘晓燕,高宇,刘畅,李丽慧. 吉林大学学报(医学版). 2019(06)
[8]黄酮类化合物的功能及其在畜牧业中的应用[J]. 郑娟,闫益波. 湖南饲料. 2019(06)
[9]转基因大豆育种[J]. 杨明明,王志坤. 大豆科技. 2019(05)
[10]转基因玉米ZZM030对大型蚤（Daphnia magna）生长和繁殖的影响[J]. 张莉,沈文静,方志翔,刘标. 农业环境科学学报. 2019(09)
博士论文
[1]大豆两个MYB转录因子基因的克隆及其功能分析[D]. 李晓薇.吉林大学 2011
硕士论文
[1]吉林35大豆胚尖遗传转化体系的优化及GmMYB12B2基因的遗传转化[D]. 田美.吉林大学 2019
[2]调控大豆异黄酮合成相关转录因子基因的克隆与表达模式分析[D]. 田玲.中国农业科学院 2014
本文编号：3308250
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
异黄酮合成途径及苯丙烷类代谢途径分支Figure1.1Isoflavonesynthesispathwayandphenylpropanemetabolicpathwaybranch在异黄酮的合成路径中，在查尔酮还原酶（CHR）、查尔酮合酶（CHS）、
第二章GmMYB12B2转基因植株的鉴定20间。加入的一抗可回收再利用，一般不超过3次）。⑤二抗加入1×PBST溶液10或15ml，根据比例加入二抗，于摇床上轻缓震荡孵育1h，孵育完成后用1×PBST溶液洗3次，每次10min。⑥显影将处理好的膜放置在显影板上，用移液器在膜表面均匀铺上提前配置好的曝光液、放入超微弱化学发光仪中显影。2.3结果2.3.1GmMYB12B2转基因植株PAT试纸条检测PAT蛋白试纸条可快速鉴别出含有PAT/bar蛋白的样品，且检测结果明显。检测PAT/bar蛋白前，加提取缓冲液提取样品蛋白，PAT/bar蛋白溶解于缓冲液中。每条试纸两端均有吸收垫，试纸上的箭头指示插入反应管的一端。样品溶液通过试纸上的薄膜渗透并被吸入上端，在试纸条中间区域观察反应结果。对于含有PAT/bar蛋白的检测样品，检测线(TestLine)将会显色，即有指示带和检测带两条带，该结果判定为阳性结果。如果检测样品为阴性，则试纸上仅显示一条带即指示带。以未转基因的受体植株材料为阴性对照，进一步鉴定阳性植株。如图2.1所示，以未转基因的W82植株为阴性对照，PAT蛋白试纸条结果表明，检测转基因株系的单株中MYB-1，MYB-2，MYB-3植株PAT蛋白试纸条检测结果均为阳性。图2.1PAT试纸条检测GmMYB12B2转基因植株Figure2.1PATteststripdetectionofGmMYB12B2transgenicplants
第二章GmMYB12B2转基因植株的鉴定212.3.2GmMYB12B2转基因植株Southernblot检测以bar序列设计上下游引物，PTF101质粒为模板PCR扩增bar基因片段，回收纯化后制备地高辛探针。以PTF-101质粒作为阳性对照，受体材料大豆叶片总DNA为阴性对照，转基因植株叶片总DNA为杂交样品，用HindIII进行37℃过夜酶切，验证外源bar基因是否转入大豆中，Southernblot杂交结果如图2.2所示，Southern杂交中阴性对照无相应条带，而MYB-1，MYB-2，MYB-3转基因株系均出现一条条带，表明MYB-1，MYB-2，MYB-3株系均为阳性植株，表明bar基因己整合到大豆基因组当中，且是以单拷贝的形式插入。图2.2Southernblot检测转基因大豆中bar基因的整合情况Figure2.2Southernblotdetectionoftheintegrationofbargenesintransgenicsoybeans通过Southernblot杂交实验，发现材料中外源bar基因的插入方式是以单拷贝形式插入，且初步确定了这些转基因材料都为阳性植株，因此这些转基因材料可用以后续的转基因安全性实验。2.3.3GmMYB12B2转基因植株Westernblot检测本研究通过WesternBlot方法分析测定了外源bar蛋白在转基因大豆组织中的表达水平，进一步验证MYB转录因子在转基因大豆后代中的表达情况。以未转基因的W82大豆材料为阴性对照，以按一定比例稀释的bar蛋白为阳性对照，使用PAT抗体进行的Westernblot结果如图2.3显示，转基因大豆MYB-1，MYB-2，23130bp9416bp6557bp4361bp2322bp2027bp564bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国转基因大豆现状与相关法规[J]. 白韵旗,程鹏,武小霞,李文滨. 大豆科技. 2019(06)
[2]大豆豆脐中异黄酮的提取工艺优化[J]. 周文红,郭咪咪,毕艳红,王朝宇,段章群. 现代食品科技. 2020(02)
[3]大豆异黄酮对生殖细胞增殖影响的研究进展[J]. 何灵芝,覃圣,撒瑞雪,徐硕,程香,马俊贤. 现代畜牧兽医. 2019(12)
[4]ELISA在基层兽医实验室遇到的问题及解决方法[J]. 张丽燕. 中国畜禽种业. 2019(12)
[5]大豆异黄酮及其功效[J]. 郭晓晖. 新农村. 2019(12)
[6]免疫层析试纸条检测技术的研究进展[J]. 周梦婕,李小盼,代荣阳,阎锡蕴,段德民. 检验医学与临床. 2019(22)
[7]大豆异黄酮对2型糖尿病围绝经期模型大鼠氧化应激损伤的保护作用及其机制[J]. 宋娜,苏东峰,刘晓燕,高宇,刘畅,李丽慧. 吉林大学学报(医学版). 2019(06)
[8]黄酮类化合物的功能及其在畜牧业中的应用[J]. 郑娟,闫益波. 湖南饲料. 2019(06)
[9]转基因大豆育种[J]. 杨明明,王志坤. 大豆科技. 2019(05)
[10]转基因玉米ZZM030对大型蚤（Daphnia magna）生长和繁殖的影响[J]. 张莉,沈文静,方志翔,刘标. 农业环境科学学报. 2019(09)
博士论文
[1]大豆两个MYB转录因子基因的克隆及其功能分析[D]. 李晓薇.吉林大学 2011
硕士论文
[1]吉林35大豆胚尖遗传转化体系的优化及GmMYB12B2基因的遗传转化[D]. 田美.吉林大学 2019
[2]调控大豆异黄酮合成相关转录因子基因的克隆与表达模式分析[D]. 田玲.中国农业科学院 2014
本文编号：3308250
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3308250.html
