TP53INP2在人脂肪干细胞成骨分化中的作用及机制研究

发布时间：2021-07-31 20:39

　　目的:人脂肪干细胞（Human adipose derived stem/stromal cells,hASCs）是骨组织工程中常用的种子细胞,在体内和体外都具有良好的成骨特性。肿瘤蛋白p53诱导的核蛋白2（Tumor protein p53-induced nuclear protein 2,TP53INP2）与细胞自噬、糖尿病、肿瘤的发生发展、肥胖的调节及成脂分化的调控等密切相关。然而,TP53INP2对hASCs成骨分化的调节作用尚不清楚。因此,本课题旨在探索TP53INP2在hASCs成骨分化过程中的作用及其相关机制。方法:体外分离、培养并鉴定hASCs,同时检测其多向分化的能力。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）、Western blot技术筛选沉默TP53INP2效率高的siRNA序列,构建TP53INP2表达沉默的细胞模型。细胞转染siRNA后成骨诱导3、7天,qRT-PCR检测成骨标记物RUNX2、ALP、OCN、COL1A1的mRNA水平;Western blot检测RUNX2蛋白的表达。利用Western ... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

hASCs显微镜下形态

重庆医科大学硕士研究生学位论文14图2.流式细胞术检测hASCs表面免疫抗原Figure2.hASCsimmunophenotypesanalysisbyflowcytometry2.3hASCs多向分化潜能2.3.1成骨分化第三代hASCs经成骨诱导21天后，行茜素红染色液染色。染色完成后在倒置相差显微镜下可见大量钙结节形成（图3A），证明hASCs可成骨分化。2.3.2成脂分化第三代hASCs经成脂诱导8天后，行饱和油红O染色液染色。染色完成后在倒置相差显微镜下可见大量被染为红色的脂滴形成（图3B），证明hASCs可成脂分化。2.3.3成软骨分化第三代hASCs经成软骨诱导30天后，切片，AlcianBlue染色后，镜下观察见细胞团内大量蓝色染色颗粒（图3C），提示糖胺聚糖的形成，表明有软骨基质的形成，证明hASCs可成软骨分化。

重庆医科大学硕士研究生学位论文15图3：hASCs多向分化图3.hASCs的多向分化A.茜素红染色；B.饱和油红O染色；C.阿尔辛兰染色Figure3.MultilineagedifferentiationofhASCs.A.AlizarinRedSstaining;B.OilRedOstaining;C.AlcianBluestainingABC

【参考文献】：
期刊论文
[1]抑制自噬对根尖乳头干细胞成骨分化水平的影响[J]. 黄颖,熊华翠,陈柯,朱晓斌,尹小萍,梁韵,罗薇,雷期音.  南方医科大学学报. 2019(01)
[2]脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识[J]. Technical Committee for Mucocutaneous Regeneration and Reconstruction of China Medicinal Biotechnology Association;.  解放军医学杂志. 2018(10)
[3]脂肪干细胞表型和标记物的研究进展[J]. 陈犹白,陈聪慧,Qixu Zhang,韩岩.  中国美容医学. 2016(03)
[4]Osteogenic potential: comparison between bone marrow and adipose-derived mesenchymal stem cells[J]. Han-Tsung Liao,Chien-Tzung Chen.  World Journal of Stem Cells. 2014(03)
[5]氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用[J]. 赵璇,徐燕,郑桂婷,沈继龙.  安徽医科大学学报. 2014(05)
[6]脂肪干细胞和生物支架应用于牙槽骨修复[J]. 曹娜,裴路,张微.  中国组织工程研究. 2014(01)
[7]人脂肪干细胞分离培养鉴定及向成骨细胞诱导分化的实验研究[J]. 王栋,鹿均先,熊传芝.  现代医学. 2008(03)



本文编号：3314150