耐碱丝状菌XJ-16的鉴定及生物学活性成份分析
发布时间：2021-08-22 09:53
放线菌（Actinomycesbovis）是一类与人类生产和生活关系极为密切的重要微生物资源,是天然抗生素主要来源之一。特别是极端环境的放线菌,具有特殊的生理特性和代谢机制,能够产生特殊的次级代谢产物,是寻找挖掘新型天然抗生素的重要来源。本研究以从新疆盐碱地分离得到的一株具有高抑菌活性的丝状菌作为出发菌株,在确定分类归属的基础上,从生物学活性、发酵条件、抑菌物质的分离纯化等方面进行了探究,为进一步开发利用该菌株奠定了基础。本论文主要研究结果如下:（1）形态学观察、生理生化试验和分子鉴定试验,表明出发菌株隶属于放线菌目,链霉菌属（Streptomyces）的蓝色类群,并命名为菌株XJ-16。XJ-16具有不耐温、非嗜盐和具有一定嗜碱性特征;酶谱分析表明XJ-16能够分泌纤维素酶、脂肪酶、脲素酶、蛋白酶、过氧化氢酶和脂肪酶。（2）发酵液抑菌实验表明,除了肺炎克雷伯菌S型没有抑制作用外,XJ-16的发酵液对5株病原细菌指示菌具有较强的抑菌活性;除了对假丝状酵母真菌—白色念珠菌有抑制作用,对5株病原真菌指示菌没有有抑菌活性;XJ-16发酵液次级代谢产物抑菌活性物质对酸碱耐受不同,对酸耐受较强、...
【文章来源】：沈阳师范大学辽宁省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
技术路线图
50μL各抗生素浓度，28℃培养5d。出现抑菌圈说明菌株对该抗生素敏感，反之不敏感。供试抗生素：盐酸林可霉素、氯霉素、硫酸卡那霉素、氨苄青霉素钠、大观霉素，供试浓度均为10mg/mL、30mg/mL、50mg/mL、100mg/mL、200mg/mL。2.3结果与分析2.3.1菌株形态特征观察2.3.1.1菌落和色素观察XJ-16菌株在高氏1号培养基上生长速度快，24h就有白色气生菌丝长出；48h后，产生蓝色色素，72h后色素变为蓝紫色，第120h变成蓝紫黑色。培养168h后，气生菌丝由白色变成灰粉色再变成绒粉色，孢子丝白色，呈放射状，菌落表面粗糙致密，如图2-1（a）所示。菌株摇床培养7d后，菌株色素颜色是蓝紫色色素，如图2-1（b）所示。图2-1菌株XJ-16菌落形态和菌株色素颜色观察Fig.2-1ObservationoncolonymorphologyandpigmentcolorofstrainXJ-16a:菌落b:色素颜色
耐碱丝状菌XJ-16的鉴定及生物学活性成份分析152.3.1.2菌丝形态显微观察采用插片法观察菌株的基内菌丝、气生菌丝、孢子形态。用物镜40×、目镜10×观察到培养3天基内菌丝呈分枝状，分叉处呈直角向外伸出，气生菌丝有1-2个螺旋，如图2-2(a)所示；用目镜10×，油镜100×观察培养7天的基内菌丝有横隔，基丝不断裂，基内菌丝有蓝色和紫色色素，如图2-2(b)所示；用目镜10×，油镜100×观察培养7天孢子圆形，孢子形成孢子链，无孢子囊，如图2-2(c)所示。图2-2菌株XJ-16形态学观察Figure2-2MorphologicalobservationofstrainXJ-16a:基丝和孢子丝b:基丝c:孢子和孢子链2.3.2菌株分子生物学鉴定提取菌株XJ-16的基因组DNA为模板，用通用引物27F和1492R，进行PCR扩增，凝胶电泳检测PCR产物结果如图2-3，与1kbMarker长度比较，菌株16SrDNA片段长为1500bp。将凝胶回收PCR产物送至上海生工生物公司测序，测序结果如图2-4，根据测序结果，用MEGA7.0软件构建系统发育树，判定该菌株的属。将菌株的16S区序列的测序结果提交到GenBank数据库，并进行BLAST相似性比对，从中选择20株同源性从高到低的相似度序列，在MEGA7.0软件abc
【参考文献】：
期刊论文
[1]4种多重耐药菌监测结果分析[J]. 赵蓬波,魏卓,张兵,杨广民. 中国实验诊断学. 2020(01)
[2]链霉菌的功能及其在农业上的应用[J]. 朱志炎,田志宏,李建雄. 热带亚热带植物学报. 2019(05)
[3]三株红树林来源链霉菌的鉴定及抗菌活性研究[J]. 郑红芸,吴越,叶景静,陈建宏,蒋莲秀,何义,黄大林. 中国药理学通报. 2019(07)
[4]多重耐药菌医院感染监测及耐药性分析[J]. 李辛. 现代临床医学. 2019(02)
[5]嗜碱放线菌的分离方法[J]. 张永光,李陈红,付梦媛,李文均. 生物资源. 2019(01)
[6]极端环境放线菌TRM45306的鉴定及次生代谢产物分析[J]. 张越锋,吕玲玲,蒋伟权. 天然产物研究与开发. 2018(10)
[7]枯草芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定、抑菌特性及发酵条件优化[J]. 张雯,卞丹,沈燕秋,王文思,刘志彬,倪莉. 中国食品学报. 2017(12)
[8]土壤中放线菌的分离与应用[J]. 詹庆,曹雅丽. 现代园艺. 2017(03)
[9]墨脱自然保护区嗜热放线菌多样性及生物活性初步研究[J]. 尹明远,张格杰,何建清. 西南大学学报(自然科学版). 2016(12)
[10]嗜盐嗜碱放线菌的研究进展与展望[J]. 加苏尔·阿不都克里木,旭格拉,塔衣尔,阿不都克里木·热依木,木尼热木·阿力木江,迪丽拜尔·托合提. 新疆师范大学学报(自然科学版). 2015(01)
博士论文
[1]利用组学方法分析嗜热链霉菌高效降解转化生物质废弃物的分子机制[D]. 孙晓萌.山东大学 2019
[2]死海放线菌新物种的多相分类鉴定及白色嗜盐多孢菌AFM 10251嗜盐机制的多组学研究[D]. 姜影影.西北农林科技大学 2018
[3]番茄灰霉菌拮抗放线菌及抑菌活性物质研究[D]. 朱茂山.沈阳农业大学 2014
[4]新疆罗布泊盐湖放线菌多样性及多相分类[D]. 关统伟.四川农业大学 2012
硕士论文
[1]抗黄瓜棒孢叶斑病放线菌的筛选及Streptomyces inhibens多相分类研究[D]. 金丽颖.东北农业大学 2019
[2]天蓝色链霉菌IclR家族转录调控蛋白SCO2832的功能初步研究[D]. 张紫茜.山东大学 2019
[3]污水中纤维素降解菌的筛选与产酶特性的初步探究[D]. 聂艳.曲阜师范大学 2018
[4]红海滩嗜碱放线菌分离鉴定及生物学活性研究[D]. 刘笑廷.沈阳师范大学 2017
[5]五株嗜盐放线菌次级代谢产物的研究[D]. 孙明伟.山东大学 2016
[6]链霉菌SN-194的筛选及其次生代谢产物对植物病原真菌的抑制作用[D]. 邹陈文翔.沈阳农业大学 2016
[7]青藏高原土壤中低温高效原油降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究[D]. 王艺霖.兰州交通大学 2015
[8]嗜酸放线菌701产纤溶酶深层发酵条件及其抗凝、溶栓性质研究[D]. 蔡尤佳.齐齐哈尔大学 2012
[9]塔里木盆地土壤放线菌分布及抗动物病原菌菌株筛选的研究[D]. 饶丽娟.吉林大学 2005
[10]酸性土壤中嗜酸签名稀有放线菌的多样性及多相分类研究[D]. 崔庆锋.西北农林科技大学 2004
本文编号：3357523
【文章来源】：沈阳师范大学辽宁省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【图文】：
技术路线图
50μL各抗生素浓度，28℃培养5d。出现抑菌圈说明菌株对该抗生素敏感，反之不敏感。供试抗生素：盐酸林可霉素、氯霉素、硫酸卡那霉素、氨苄青霉素钠、大观霉素，供试浓度均为10mg/mL、30mg/mL、50mg/mL、100mg/mL、200mg/mL。2.3结果与分析2.3.1菌株形态特征观察2.3.1.1菌落和色素观察XJ-16菌株在高氏1号培养基上生长速度快，24h就有白色气生菌丝长出；48h后，产生蓝色色素，72h后色素变为蓝紫色，第120h变成蓝紫黑色。培养168h后，气生菌丝由白色变成灰粉色再变成绒粉色，孢子丝白色，呈放射状，菌落表面粗糙致密，如图2-1（a）所示。菌株摇床培养7d后，菌株色素颜色是蓝紫色色素，如图2-1（b）所示。图2-1菌株XJ-16菌落形态和菌株色素颜色观察Fig.2-1ObservationoncolonymorphologyandpigmentcolorofstrainXJ-16a:菌落b:色素颜色
耐碱丝状菌XJ-16的鉴定及生物学活性成份分析152.3.1.2菌丝形态显微观察采用插片法观察菌株的基内菌丝、气生菌丝、孢子形态。用物镜40×、目镜10×观察到培养3天基内菌丝呈分枝状，分叉处呈直角向外伸出，气生菌丝有1-2个螺旋，如图2-2(a)所示；用目镜10×，油镜100×观察培养7天的基内菌丝有横隔，基丝不断裂，基内菌丝有蓝色和紫色色素，如图2-2(b)所示；用目镜10×，油镜100×观察培养7天孢子圆形，孢子形成孢子链，无孢子囊，如图2-2(c)所示。图2-2菌株XJ-16形态学观察Figure2-2MorphologicalobservationofstrainXJ-16a:基丝和孢子丝b:基丝c:孢子和孢子链2.3.2菌株分子生物学鉴定提取菌株XJ-16的基因组DNA为模板，用通用引物27F和1492R，进行PCR扩增，凝胶电泳检测PCR产物结果如图2-3，与1kbMarker长度比较，菌株16SrDNA片段长为1500bp。将凝胶回收PCR产物送至上海生工生物公司测序，测序结果如图2-4，根据测序结果，用MEGA7.0软件构建系统发育树，判定该菌株的属。将菌株的16S区序列的测序结果提交到GenBank数据库，并进行BLAST相似性比对，从中选择20株同源性从高到低的相似度序列，在MEGA7.0软件abc
【参考文献】：
期刊论文
[1]4种多重耐药菌监测结果分析[J]. 赵蓬波,魏卓,张兵,杨广民. 中国实验诊断学. 2020(01)
[2]链霉菌的功能及其在农业上的应用[J]. 朱志炎,田志宏,李建雄. 热带亚热带植物学报. 2019(05)
[3]三株红树林来源链霉菌的鉴定及抗菌活性研究[J]. 郑红芸,吴越,叶景静,陈建宏,蒋莲秀,何义,黄大林. 中国药理学通报. 2019(07)
[4]多重耐药菌医院感染监测及耐药性分析[J]. 李辛. 现代临床医学. 2019(02)
[5]嗜碱放线菌的分离方法[J]. 张永光,李陈红,付梦媛,李文均. 生物资源. 2019(01)
[6]极端环境放线菌TRM45306的鉴定及次生代谢产物分析[J]. 张越锋,吕玲玲,蒋伟权. 天然产物研究与开发. 2018(10)
[7]枯草芽孢杆菌抑菌活性物质鉴定、抑菌特性及发酵条件优化[J]. 张雯,卞丹,沈燕秋,王文思,刘志彬,倪莉. 中国食品学报. 2017(12)
[8]土壤中放线菌的分离与应用[J]. 詹庆,曹雅丽. 现代园艺. 2017(03)
[9]墨脱自然保护区嗜热放线菌多样性及生物活性初步研究[J]. 尹明远,张格杰,何建清. 西南大学学报(自然科学版). 2016(12)
[10]嗜盐嗜碱放线菌的研究进展与展望[J]. 加苏尔·阿不都克里木,旭格拉,塔衣尔,阿不都克里木·热依木,木尼热木·阿力木江,迪丽拜尔·托合提. 新疆师范大学学报(自然科学版). 2015(01)
博士论文
[1]利用组学方法分析嗜热链霉菌高效降解转化生物质废弃物的分子机制[D]. 孙晓萌.山东大学 2019
[2]死海放线菌新物种的多相分类鉴定及白色嗜盐多孢菌AFM 10251嗜盐机制的多组学研究[D]. 姜影影.西北农林科技大学 2018
[3]番茄灰霉菌拮抗放线菌及抑菌活性物质研究[D]. 朱茂山.沈阳农业大学 2014
[4]新疆罗布泊盐湖放线菌多样性及多相分类[D]. 关统伟.四川农业大学 2012
硕士论文
[1]抗黄瓜棒孢叶斑病放线菌的筛选及Streptomyces inhibens多相分类研究[D]. 金丽颖.东北农业大学 2019
[2]天蓝色链霉菌IclR家族转录调控蛋白SCO2832的功能初步研究[D]. 张紫茜.山东大学 2019
[3]污水中纤维素降解菌的筛选与产酶特性的初步探究[D]. 聂艳.曲阜师范大学 2018
[4]红海滩嗜碱放线菌分离鉴定及生物学活性研究[D]. 刘笑廷.沈阳师范大学 2017
[5]五株嗜盐放线菌次级代谢产物的研究[D]. 孙明伟.山东大学 2016
[6]链霉菌SN-194的筛选及其次生代谢产物对植物病原真菌的抑制作用[D]. 邹陈文翔.沈阳农业大学 2016
[7]青藏高原土壤中低温高效原油降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究[D]. 王艺霖.兰州交通大学 2015
[8]嗜酸放线菌701产纤溶酶深层发酵条件及其抗凝、溶栓性质研究[D]. 蔡尤佳.齐齐哈尔大学 2012
[9]塔里木盆地土壤放线菌分布及抗动物病原菌菌株筛选的研究[D]. 饶丽娟.吉林大学 2005
[10]酸性土壤中嗜酸签名稀有放线菌的多样性及多相分类研究[D]. 崔庆锋.西北农林科技大学 2004
本文编号：3357523
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