鹅源星状病毒的分离鉴定及相关生物学特性的研究
发布时间：2021-09-03 07:31
星状病毒（Astrovirus,AstV）是一种没有囊膜且单股正链的RNA病毒,属于星状病毒科。该病毒目前已从多种哺乳动物以及鸡、火鸡、鸭、鹅和鸽子等禽类中检测出来,与多种动物的腹泻疾病有关。自2017年,在我国山东、安徽、广东、湖南和江苏等地陆续出现雏鹅内脏型痛风病的报道,鹅源星状病毒是引起该病的病原,其致死率可达30%以上,导致养鹅产业严重的经济损失。本研究利用RT-PCR检测鹅源星状病毒阳性;收集结果为阳性的死亡鹅病料的内脏研磨上清进行病毒分离;分离获得两株稳定繁殖的星状病毒毒株:GAstV/Goose/2019/HLJPF和GAstV/Goose/2018/HLJ01;其中GAstV/Goose/2019/HLJPF的ELD50为10-2.6/0.2mL。鹅胚分离传代结果表明病毒接种鹅胚可使胚体全身出血、体生长发育受到抑制或死亡等病变。分析NCBI上公布的GAstV序列,设计合成了一组引物,采取了RT-PCR技术来扩增GAstV的基因组片段,获取GAstV的核酸序列进而拼接GAstV的全基因组,并分析了GAstV的结构组成、抗原表位、...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人星状病毒Fig.1-1ElectronmicroscopyofHAstV
文献综述3图1-2星状病毒全基因组结构Fig.1-2CompletegenomeorganizationsofAstV1.2.4病毒非结构蛋白与结构蛋白ORF1a和ORF1b构成了星状病毒的非结构蛋白。其中ORF1a编码nspla蛋白（约102kDa），ORF1a与ORF1b经由核糖体移位机制编码形成了nsplab（约160kDa）蛋白[20]。在病毒自身编码的蛋白酶水解以及细胞蛋白酶的作用之下，Nsp1a和nsplab形成了病毒蛋白酶（v-Pro），RdRp和病毒基因组连接蛋白（VPg）等小分子蛋白[20]。RdRp是由ORF1b编码的RFS进行翻译的，RdRp在病毒的复制中起着关键的作用，但是绝大多数的RdRp的校对功能匮乏，而且其保真性有缺陷，十分容易在复制过程中出现错配和突变进而引起病毒的高度变异[13]。星状病毒的衣壳结构蛋白（CP）是由ORF2编码的[21]。根据保守性的高低可将病毒的衣壳蛋白划分成为两个区域：一个高度保守的N端，同时具有一个必需氨基酸区域，进而构成病毒衣壳的内核部分；另一个为构成病毒衣壳的突起部分的高度变异的C端。TAstV-2、DAstV和CAstV等星状病毒都具有由25~32个碱性氨基酸组成的衣壳蛋白N端，并且都拥有一个保守的SRSRSRSRSR基序。然而在TAstV-1和ANV中，它们的衣壳蛋白N端并未拥有重复的SR基序[22]。衣壳蛋白通过与宿主相互作用来决定细胞向性、介导细胞入侵进而激发宿主的免疫应答，也可以包裹病毒核酸，同时它也是星状病毒的结构屏障[23]。目前已有研究表明星状病毒衣壳蛋白可以抑制经典的和甘露糖补体途径，它通过结合补体C1和甘露糖凝集素（MBL）形成了一种独特的补体通路抑制剂[24]。另有发现星状病毒衣壳蛋白有肠毒素的潜在作用[1,25]。1.3星状病毒的培养特性与理化性质研究早期鉴于缺乏病毒相适应的实验室宿主系统，研究人员对星状病毒的生长特性的了解十分的匮乏。1990年，Shimizu等[26]?
鹅源星状病毒的分离鉴定及相关生物学特性的研究162.3.1自然感染病例的临床症状及病变临床上，雏鹅多在5日龄左右开始发病，发病雏鹅在12日龄左右达到死亡高峰，雏鹅长至20日龄左右时，鹅群的死亡率可达50%。感染AstV的雏鹅临床表现为精神沉郁，倦动厌食，排灰白色稀便。剖检死亡鹅可见内脏器官肝脏、心脏表面有大量白色尿酸盐沉积，肾脏出血肿大，表面及输尿管内也可见明显的灰白色尿酸盐，胆汁中有大量尿酸盐颗粒（图2-1）。固定发病鹅肝脏和肾脏组织，HE染色结果表明肝脏实质内可见多处炎性细胞浸润灶，肝细胞变性坏死；肾皮质近浆膜面局部出血，皮质肾小管上皮细胞变性，多量坏死；肾小球囊扩张，系膜细胞数量减少，皮质肾小管上皮细胞变性，多量坏死（图2-1）。研磨后的肝脏组织液经磷钨酸负染后，电镜观察到约20-30nm的病毒粒子（图2-2）。图2-1自然感染死亡鹅只组织剖检病变Fig.2-1PostmortemexaminationofdeadgoosewithnaturalinfectionA:Urate-likeexudationofliverandheart;B:Kidneysurfaceuratedeposits,uretersfilledwithurate;C:A：肝脏、心脏包被尿酸盐样渗出；B：肾脏尿酸盐沉积，输尿管充满尿酸盐；C：胆囊内充满尿酸盐；D：肝脏实质炎性细胞浸润，肝细胞变性坏死；E：肾皮质局部出血，肾小管上皮细胞变性坏死；F：肾小球囊扩张，皮质肾小管上皮细胞变性坏死。Gallbladderfilledwithurate;D:Liverparenchymalinflammatorycellinfiltration,livercelldegenerationandnecrosis;E:Localrenalcortexbleeding,renaltubularepithelialcellsdegenerationandnecrosis;F:Glomerulardilatation,degenerationandnecrosisofcorticalrenaltubularepithelialcells.2.3结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]新发雏鹅痛风研究进展[J]. 马军. 山东畜牧兽医. 2019(07)
[2]猪星状病毒ORF2基因的克隆及序列分析[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,刘欢,卢冰霞,张民秀,廖承球,黄伟坚. 中国兽医杂志. 2012(12)
硕士论文
[1]猪星状病毒1型（PAstV1）GX1株的致病性研究[D]. 王翠.广西大学 2019
[2]鸭星状病毒1型D51株DNA-launched感染性克隆的构建与病毒拯救[D]. 李海娥.山东农业大学 2016
[3]猪星状病毒分离鉴定及其全基因组序列分析和衣壳蛋白原核表达[D]. 刘欢.广西大学 2014
本文编号：3380693
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人星状病毒Fig.1-1ElectronmicroscopyofHAstV
文献综述3图1-2星状病毒全基因组结构Fig.1-2CompletegenomeorganizationsofAstV1.2.4病毒非结构蛋白与结构蛋白ORF1a和ORF1b构成了星状病毒的非结构蛋白。其中ORF1a编码nspla蛋白（约102kDa），ORF1a与ORF1b经由核糖体移位机制编码形成了nsplab（约160kDa）蛋白[20]。在病毒自身编码的蛋白酶水解以及细胞蛋白酶的作用之下，Nsp1a和nsplab形成了病毒蛋白酶（v-Pro），RdRp和病毒基因组连接蛋白（VPg）等小分子蛋白[20]。RdRp是由ORF1b编码的RFS进行翻译的，RdRp在病毒的复制中起着关键的作用，但是绝大多数的RdRp的校对功能匮乏，而且其保真性有缺陷，十分容易在复制过程中出现错配和突变进而引起病毒的高度变异[13]。星状病毒的衣壳结构蛋白（CP）是由ORF2编码的[21]。根据保守性的高低可将病毒的衣壳蛋白划分成为两个区域：一个高度保守的N端，同时具有一个必需氨基酸区域，进而构成病毒衣壳的内核部分；另一个为构成病毒衣壳的突起部分的高度变异的C端。TAstV-2、DAstV和CAstV等星状病毒都具有由25~32个碱性氨基酸组成的衣壳蛋白N端，并且都拥有一个保守的SRSRSRSRSR基序。然而在TAstV-1和ANV中，它们的衣壳蛋白N端并未拥有重复的SR基序[22]。衣壳蛋白通过与宿主相互作用来决定细胞向性、介导细胞入侵进而激发宿主的免疫应答，也可以包裹病毒核酸，同时它也是星状病毒的结构屏障[23]。目前已有研究表明星状病毒衣壳蛋白可以抑制经典的和甘露糖补体途径，它通过结合补体C1和甘露糖凝集素（MBL）形成了一种独特的补体通路抑制剂[24]。另有发现星状病毒衣壳蛋白有肠毒素的潜在作用[1,25]。1.3星状病毒的培养特性与理化性质研究早期鉴于缺乏病毒相适应的实验室宿主系统，研究人员对星状病毒的生长特性的了解十分的匮乏。1990年，Shimizu等[26]?
鹅源星状病毒的分离鉴定及相关生物学特性的研究162.3.1自然感染病例的临床症状及病变临床上，雏鹅多在5日龄左右开始发病，发病雏鹅在12日龄左右达到死亡高峰，雏鹅长至20日龄左右时，鹅群的死亡率可达50%。感染AstV的雏鹅临床表现为精神沉郁，倦动厌食，排灰白色稀便。剖检死亡鹅可见内脏器官肝脏、心脏表面有大量白色尿酸盐沉积，肾脏出血肿大，表面及输尿管内也可见明显的灰白色尿酸盐，胆汁中有大量尿酸盐颗粒（图2-1）。固定发病鹅肝脏和肾脏组织，HE染色结果表明肝脏实质内可见多处炎性细胞浸润灶，肝细胞变性坏死；肾皮质近浆膜面局部出血，皮质肾小管上皮细胞变性，多量坏死；肾小球囊扩张，系膜细胞数量减少，皮质肾小管上皮细胞变性，多量坏死（图2-1）。研磨后的肝脏组织液经磷钨酸负染后，电镜观察到约20-30nm的病毒粒子（图2-2）。图2-1自然感染死亡鹅只组织剖检病变Fig.2-1PostmortemexaminationofdeadgoosewithnaturalinfectionA:Urate-likeexudationofliverandheart;B:Kidneysurfaceuratedeposits,uretersfilledwithurate;C:A：肝脏、心脏包被尿酸盐样渗出；B：肾脏尿酸盐沉积，输尿管充满尿酸盐；C：胆囊内充满尿酸盐；D：肝脏实质炎性细胞浸润，肝细胞变性坏死；E：肾皮质局部出血，肾小管上皮细胞变性坏死；F：肾小球囊扩张，皮质肾小管上皮细胞变性坏死。Gallbladderfilledwithurate;D:Liverparenchymalinflammatorycellinfiltration,livercelldegenerationandnecrosis;E:Localrenalcortexbleeding,renaltubularepithelialcellsdegenerationandnecrosis;F:Glomerulardilatation,degenerationandnecrosisofcorticalrenaltubularepithelialcells.2.3结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]新发雏鹅痛风研究进展[J]. 马军. 山东畜牧兽医. 2019(07)
[2]猪星状病毒ORF2基因的克隆及序列分析[J]. 兰家暖,刘磊,郭旋,刘欢,卢冰霞,张民秀,廖承球,黄伟坚. 中国兽医杂志. 2012(12)
硕士论文
[1]猪星状病毒1型（PAstV1）GX1株的致病性研究[D]. 王翠.广西大学 2019
[2]鸭星状病毒1型D51株DNA-launched感染性克隆的构建与病毒拯救[D]. 李海娥.山东农业大学 2016
[3]猪星状病毒分离鉴定及其全基因组序列分析和衣壳蛋白原核表达[D]. 刘欢.广西大学 2014
本文编号：3380693
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