基于转基因水sh稻窄叶株系的筛先与鉴定
发布时间：2021-10-08 17:37
转录因子是调控基因表达的上游元件。近年来,随着分子生物技术与植物基因工程研究的不断深入,利用遗传转化将C4光合作用途径的转录因子基因转入C3植物中进行基因表达的调控,以期提高C3植物光合作用效率成为研究热点。水稻,是一种重要的粮食作物和经济作物。本研究主要利用Gateway克隆技术构建目的基因的表达载体,通过农杆菌介导法将目的基因转入水稻品种日本晴。对转基因T0、T1代植株进行农艺性状、光合作用及内源生长素代谢相关基因的测定,以探究目的基因对转基因植株的影响。具体研究内容及试验结果如下:1.利用Gateway克隆技术的LR反应,将目的基因连接到目的载体上,构建成用于遗传转化的表达载体,共构建了20个目的基因的表达载体。2.利用热激法将表达载体转入大肠杆菌DH5α。在含壮观霉素的LB培养基对转化后的大肠杆菌进行初筛后,选圆形、乳白色单菌落进行PCR检测载体上的目的基因和潮霉素基因。PCR产物经测序、比对,验证载体转入大肠杆菌DH5α。3.利用试剂盒进行大肠杆菌DH5α内的质粒提取,通过琼脂糖凝胶电泳对质粒提取结果进行验证。...
【文章来源】：河北科技大学河北省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 课题背景
1.1.1 研究背景
1.1.2 选题意义
1.2 植物叶片发育概述
1.2.1 植物叶片的发育
1.2.2 水稻叶片的形态结构及功能
1.2.3 生长素对叶片发育影响
1.3 植物转录因子的概述
1.3.1 植物转录因子的基本结构
1.3.2 植物转录因子的功能
1.4 Gateway技术的概述
1.4.1 Gateway技术构建表达载体的原理
1.4.2 Gateway技术的应用
1.5 植物遗传转化的方法
1.5.1 基因枪法
1.5.2 花粉管通道法
1.5.3 农杆菌介导法
1.6 水稻窄叶突变体研究的概述
1.6.1 窄叶突变体的研究进展
1.6.2 窄叶突变体在育种上的应用
第2章 表达载体的构建
2.1 试验材料、试剂和仪器
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验试剂与仪器
2.2 试验方法
2.2.1 表达载体的构建
2.2.2 热激法转化大肠杆菌
2.2.3 大肠杆菌菌落PCR的筛选
2.3 试验结果及分析
2.3.1 抗壮观霉素的大肠杆菌单菌落筛选
2.3.2 菌落PCR的检测
2.4 讨论
2.5 本章小结
第3章 根癌农杆菌菌株AGL1的转化
3.1 试验材料、药品和仪器
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验药品及仪器
3.2 试验方法
3.2.1 表达载体质粒DNA的提取
3.2.2 农杆菌感受态的制备
3.2.3 液氮冻融法转化农杆菌
3.3 试验结果与分析
3.3.1 质粒提取结果与分析
3.3.2 转化根癌农杆菌的筛选及鉴定
3.4 讨论
3.4.1 农杆菌感受态的制备
3.4.2 农杆菌感受态的转化
3.5 本章小结
第4章 水稻的遗传转化
4.1 试验材料、试剂和仪器
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验试剂和仪器
4.2 试验方法
4.2.1 农杆菌介导的遗传转化
4.2.2 T0代转基因植株的阳性检验
4.2.3 T0代转基因植株的表型观测
4.3 结果及分析
4.3.1 愈伤组织的诱导
4.3.2 抗性愈伤的筛选
4.3.3 胚性愈伤的预分化及分化
4.3.4 壮苗及移栽
4.3.5 T0代窄叶表型植株的阳性检验
4.3.6 T0代植株的表型观测
4.4 讨论
4.4.1 培养基的配制
4.4.2 愈伤组织的选取
4.5 本章小结
第5章 转基因水稻的性状检测
5.1 试验材料、试剂及仪器
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验试剂及仪器
5.2 试验方法
5.2.1 转基因水稻的阳性检验
5.2.2 转基因水稻农艺性状的检测
5.2.3 转基因水稻光合作用的测定
5.3 试验结果与分析
5.3.1 转基因水稻性状分离比统计与分析
5.3.2 转基因水稻的阳性检测
5.3.3 转基因水稻农艺性状的检测
5.3.4 转基因水稻光合作用的分析
5.4 讨论
5.5 本章小结
第6章 生长素相关基因的定量分析
6.1 试验材料、试剂及仪器
6.1.1 试验材料
6.1.2 试验试剂及仪器
6.2 试验方法
6.2.1 水稻叶片总RNA的提取
6.2.2 cDNA的合成
6.2.3 生长素相关基因的qRT-PCR的测定
6.3 试验结果与分析
6.3.1 RNA的质量检测
6.3.2 qRT-PCR结果分析
6.4 讨论
6.4.1 RNA的提取及检测
6.4.2 实时荧光定量PCR
6.5 本章小结
结论
附录
附录1
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用一步克隆方法快速高效构建Gateway入门载体[J]. 张艳军,赵利,李雨佳,赵江哲,张可伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2020(01)
[2]论水稻栽培现状及高产栽培技术意见[J]. 金亮亮. 种子科技. 2019(10)
[3]我国水稻栽培现状、高产栽培技术及展望[J]. 杨金鹏. 乡村科技. 2019(19)
[4]植物叶缘和叶脉发育调控的研究进展[J]. 郑梦迪,王春阳,张寒,张彦,汪兴军. 生物资源. 2019(01)
[5]转录因子及其动态成像分析技术的研究进展[J]. 何丽娜,赵艳霞,崔亚宁,玉猛,李晓娟,林金星. 电子显微学报. 2019(01)
[6]2个不同番茄品系fasciated基因克隆及表达载体构建[J]. 刘爽. 江苏农业科学. 2018(20)
[7]水稻转录因子基因OsSHR2的表达特征及其在营养生长中的调控作用[J]. 张占田,孙雅菲,艾昊,罗闻真,冯冰,孙文献,徐国华,孙淑斌. 中国水稻科学. 2018(05)
[8]植物叶缘形态的发育调控机理[J]. 柯锦秀,陈多,郭延平. 生物多样性. 2018(09)
[9]中国自主知识产权植物转化方法研究进展[J]. 张虎,张鹏华,崔爱民,单皓,张久刚. 农学学报. 2018(08)
[10]花椰菜ERF114基因的克隆及Gateway技术构建表达载体[J]. 韩占品,任健,于玮玮,范夕玲,李慧. 西南农业学报. 2018(06)
硕士论文
[1]生长素极性运输调控早期叶原基近远轴极性建立的研究[D]. 史坚敏.上海师范大学 2017
[2]水稻窄卷叶突变体nrl4的遗传分析与基因定位[D]. 梁容.浙江大学 2017
本文编号：3424637
【文章来源】：河北科技大学河北省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 课题背景
1.1.1 研究背景
1.1.2 选题意义
1.2 植物叶片发育概述
1.2.1 植物叶片的发育
1.2.2 水稻叶片的形态结构及功能
1.2.3 生长素对叶片发育影响
1.3 植物转录因子的概述
1.3.1 植物转录因子的基本结构
1.3.2 植物转录因子的功能
1.4 Gateway技术的概述
1.4.1 Gateway技术构建表达载体的原理
1.4.2 Gateway技术的应用
1.5 植物遗传转化的方法
1.5.1 基因枪法
1.5.2 花粉管通道法
1.5.3 农杆菌介导法
1.6 水稻窄叶突变体研究的概述
1.6.1 窄叶突变体的研究进展
1.6.2 窄叶突变体在育种上的应用
第2章 表达载体的构建
2.1 试验材料、试剂和仪器
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验试剂与仪器
2.2 试验方法
2.2.1 表达载体的构建
2.2.2 热激法转化大肠杆菌
2.2.3 大肠杆菌菌落PCR的筛选
2.3 试验结果及分析
2.3.1 抗壮观霉素的大肠杆菌单菌落筛选
2.3.2 菌落PCR的检测
2.4 讨论
2.5 本章小结
第3章 根癌农杆菌菌株AGL1的转化
3.1 试验材料、药品和仪器
3.1.1 试验材料
3.1.2 试验药品及仪器
3.2 试验方法
3.2.1 表达载体质粒DNA的提取
3.2.2 农杆菌感受态的制备
3.2.3 液氮冻融法转化农杆菌
3.3 试验结果与分析
3.3.1 质粒提取结果与分析
3.3.2 转化根癌农杆菌的筛选及鉴定
3.4 讨论
3.4.1 农杆菌感受态的制备
3.4.2 农杆菌感受态的转化
3.5 本章小结
第4章 水稻的遗传转化
4.1 试验材料、试剂和仪器
4.1.1 试验材料
4.1.2 试验试剂和仪器
4.2 试验方法
4.2.1 农杆菌介导的遗传转化
4.2.2 T0代转基因植株的阳性检验
4.2.3 T0代转基因植株的表型观测
4.3 结果及分析
4.3.1 愈伤组织的诱导
4.3.2 抗性愈伤的筛选
4.3.3 胚性愈伤的预分化及分化
4.3.4 壮苗及移栽
4.3.5 T0代窄叶表型植株的阳性检验
4.3.6 T0代植株的表型观测
4.4 讨论
4.4.1 培养基的配制
4.4.2 愈伤组织的选取
4.5 本章小结
第5章 转基因水稻的性状检测
5.1 试验材料、试剂及仪器
5.1.1 试验材料
5.1.2 试验试剂及仪器
5.2 试验方法
5.2.1 转基因水稻的阳性检验
5.2.2 转基因水稻农艺性状的检测
5.2.3 转基因水稻光合作用的测定
5.3 试验结果与分析
5.3.1 转基因水稻性状分离比统计与分析
5.3.2 转基因水稻的阳性检测
5.3.3 转基因水稻农艺性状的检测
5.3.4 转基因水稻光合作用的分析
5.4 讨论
5.5 本章小结
第6章 生长素相关基因的定量分析
6.1 试验材料、试剂及仪器
6.1.1 试验材料
6.1.2 试验试剂及仪器
6.2 试验方法
6.2.1 水稻叶片总RNA的提取
6.2.2 cDNA的合成
6.2.3 生长素相关基因的qRT-PCR的测定
6.3 试验结果与分析
6.3.1 RNA的质量检测
6.3.2 qRT-PCR结果分析
6.4 讨论
6.4.1 RNA的提取及检测
6.4.2 实时荧光定量PCR
6.5 本章小结
结论
附录
附录1
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]利用一步克隆方法快速高效构建Gateway入门载体[J]. 张艳军,赵利,李雨佳,赵江哲,张可伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2020(01)
[2]论水稻栽培现状及高产栽培技术意见[J]. 金亮亮. 种子科技. 2019(10)
[3]我国水稻栽培现状、高产栽培技术及展望[J]. 杨金鹏. 乡村科技. 2019(19)
[4]植物叶缘和叶脉发育调控的研究进展[J]. 郑梦迪,王春阳,张寒,张彦,汪兴军. 生物资源. 2019(01)
[5]转录因子及其动态成像分析技术的研究进展[J]. 何丽娜,赵艳霞,崔亚宁,玉猛,李晓娟,林金星. 电子显微学报. 2019(01)
[6]2个不同番茄品系fasciated基因克隆及表达载体构建[J]. 刘爽. 江苏农业科学. 2018(20)
[7]水稻转录因子基因OsSHR2的表达特征及其在营养生长中的调控作用[J]. 张占田,孙雅菲,艾昊,罗闻真,冯冰,孙文献,徐国华,孙淑斌. 中国水稻科学. 2018(05)
[8]植物叶缘形态的发育调控机理[J]. 柯锦秀,陈多,郭延平. 生物多样性. 2018(09)
[9]中国自主知识产权植物转化方法研究进展[J]. 张虎,张鹏华,崔爱民,单皓,张久刚. 农学学报. 2018(08)
[10]花椰菜ERF114基因的克隆及Gateway技术构建表达载体[J]. 韩占品,任健,于玮玮,范夕玲,李慧. 西南农业学报. 2018(06)
硕士论文
[1]生长素极性运输调控早期叶原基近远轴极性建立的研究[D]. 史坚敏.上海师范大学 2017
[2]水稻窄卷叶突变体nrl4的遗传分析与基因定位[D]. 梁容.浙江大学 2017
本文编号：3424637
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3424637.html
