p400在小鼠植入前胚胎及胚胎成纤维细胞中的功能初探
发布时间：2021-10-10 11:27
p400（基因符号Ep400）被鉴定为新型腺病毒E1A结合复合物,属于SWR1类DNA依赖性染色质重塑ATP酶,含有SWI2/SNF2型的ATP酶结构域、SANT结构域、HAS结构域以及富含谷氨酰胺的结构域。p400在DNA损伤、组蛋白置换、细胞周期与着床后胚胎发育等过程中发挥重要作用。然而,当前对于p400在小鼠植入前胚胎发育过程中的功能所知甚少。因此,本研究重点探索p400在小鼠植入前胚胎发育过程中发挥的功能。一、检测小鼠各阶段植入前胚胎中p400的动态变化。收集小鼠合子（10h）、2-细胞（24h）、4-细胞（48h）、桑椹胚（72h）、囊胚（96h）五个时期的植入前胚胎与小鼠生发泡（germinal vesicle,GV）时期的卵母细胞,使用免疫荧光染色技术检测p400蛋白在植入前胚胎中的表达。显示p400在小鼠植入前胚胎各个时期均有表达,并且主要表达于细胞核中。随着小鼠植入前胚胎的发育,p400在受精前的GV时期至受精后的2-细胞时期表达量逐渐升高,4-细胞时期表达量降低,桑椹胚至囊胚时期再次升高,并且在囊胚时期达到最高表达量。接着通过实时荧光定量PCR检测p400的mRNA...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
p400的结构示意图[12]
内蒙古大学硕士学位论文8图1.2p400介导的细胞生长阻滞与凋亡的模式图[12]Figure1.2Patterndiagramofp400-mediatedcellgrowtharrestandapoptosis2.4p400在DNA损伤修复过程中的功能2.4.1引起DNA损伤的原因由于外界环境因素或生物体内部因素，生物体细胞内时刻都存在着DNA分子的损伤或改变。如果无法精确高效的更正这些DNA损伤，则会导致细胞的死亡，进一步导致基因组不稳定，出现遗传信息传递错误。DNA损伤整体可分为两大类，一类是内源性的DNA损伤，包含复制错误、DNA碱基错配、拓扑异构酶—DNA复合物形成、自然发生的碱基脱氨基作用、无碱基位点的出现和氧化导致的DNA损伤；另一类是外源性物质导致的DNA损伤，包括电离辐射（Ionizingradiation,IR）、紫外线辐射（Ultraviolet,UV）、毒素、烷化剂等物质以及环境压力[65]。重复序列中的链滑动事件会累积更多的复制错误，从而导致核苷酸的插入和缺失，进而可能改变阅读框[66]。在人类基因组中发现了7个TOP基因，拓扑异构酶的作用也会导致DNA损伤的出现，如TOPI、TOPII和TOPIII，这些酶的主要作用是消除复制和转录过程中DNA上的超螺旋张力[67,68]。碱基脱氨基作用是人类细胞自发诱变的主要来源，DNA中的胞嘧啶（C）、腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）和5-甲基胞嘧啶（5mC）失去其环外胺而分别变成尿嘧啶（U）次黄嘌呤、黄嘌呤和胸腺嘧啶（T）。这些碱基的脱氨基事件在单链DNA中的发生频率要比双链DNA高得多，并且在主动复制、转录和重组的过程中，瞬态单链通常会加剧这种自发的碱基脱氨基作用的发生[69,70]。当连接含氮碱基和糖磷酸骨架的N-糖基键，通过自发水解或被DNA糖基化酶裂解，在碱基切除修复途径（Base-excisionrepair,BER）中生
大量缺失[96]，该修复活动被称为替代非同源末端连接（AlternativeNHEJ,Alt-EJ）。p400通过掺入组蛋白变体H2A.Z控制Ku向DSB的募集而影响NHEJ[97]。p400参与了Alt-EJ途径的控制，并防止了DSB处的大缺失，p400耗竭对经典NHEJ途径没有任何影响，并且可以阻碍Alt-EJ的发生[98]。首先，Alt-EJ的增加被切除的抑制作用所阻止，其次p400促进Rad51蛋白的募集，导致Alt-EJ蛋白募集受到抑制，而p400对Alt-EJ途径的抑制作用不完全是由于HR途径的缺陷或细胞周期分布的改变[98]。由此可以提出p400针对DSB的修复模型，如图1.3所示。图1.3p400调控HR和NHEJ模型图[98]p400的缺失会使DSB修复转向NHEJ，短片段的删除仍旧使用经典的NHEJ途径，一旦出现长片段的删除，修复途径转向容易出错的AltEJ，出现遗传不稳定。Figure1.3p400regulationofHRandNHEJmodelDeletionofp400willcauseDSBrepairtoswitchtoNHEJ.ThedeletionofshortfragmentsstillusestheclassicNHEJapproach.Oncethedeletionoflongsegmentsoccurs,therepairapproachshiftstoerror-proneAltEJandgeneticinstabilityoccurs.
本文编号：3428286
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
p400的结构示意图[12]
内蒙古大学硕士学位论文8图1.2p400介导的细胞生长阻滞与凋亡的模式图[12]Figure1.2Patterndiagramofp400-mediatedcellgrowtharrestandapoptosis2.4p400在DNA损伤修复过程中的功能2.4.1引起DNA损伤的原因由于外界环境因素或生物体内部因素，生物体细胞内时刻都存在着DNA分子的损伤或改变。如果无法精确高效的更正这些DNA损伤，则会导致细胞的死亡，进一步导致基因组不稳定，出现遗传信息传递错误。DNA损伤整体可分为两大类，一类是内源性的DNA损伤，包含复制错误、DNA碱基错配、拓扑异构酶—DNA复合物形成、自然发生的碱基脱氨基作用、无碱基位点的出现和氧化导致的DNA损伤；另一类是外源性物质导致的DNA损伤，包括电离辐射（Ionizingradiation,IR）、紫外线辐射（Ultraviolet,UV）、毒素、烷化剂等物质以及环境压力[65]。重复序列中的链滑动事件会累积更多的复制错误，从而导致核苷酸的插入和缺失，进而可能改变阅读框[66]。在人类基因组中发现了7个TOP基因，拓扑异构酶的作用也会导致DNA损伤的出现，如TOPI、TOPII和TOPIII，这些酶的主要作用是消除复制和转录过程中DNA上的超螺旋张力[67,68]。碱基脱氨基作用是人类细胞自发诱变的主要来源，DNA中的胞嘧啶（C）、腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）和5-甲基胞嘧啶（5mC）失去其环外胺而分别变成尿嘧啶（U）次黄嘌呤、黄嘌呤和胸腺嘧啶（T）。这些碱基的脱氨基事件在单链DNA中的发生频率要比双链DNA高得多，并且在主动复制、转录和重组的过程中，瞬态单链通常会加剧这种自发的碱基脱氨基作用的发生[69,70]。当连接含氮碱基和糖磷酸骨架的N-糖基键，通过自发水解或被DNA糖基化酶裂解，在碱基切除修复途径（Base-excisionrepair,BER）中生
大量缺失[96]，该修复活动被称为替代非同源末端连接（AlternativeNHEJ,Alt-EJ）。p400通过掺入组蛋白变体H2A.Z控制Ku向DSB的募集而影响NHEJ[97]。p400参与了Alt-EJ途径的控制，并防止了DSB处的大缺失，p400耗竭对经典NHEJ途径没有任何影响，并且可以阻碍Alt-EJ的发生[98]。首先，Alt-EJ的增加被切除的抑制作用所阻止，其次p400促进Rad51蛋白的募集，导致Alt-EJ蛋白募集受到抑制，而p400对Alt-EJ途径的抑制作用不完全是由于HR途径的缺陷或细胞周期分布的改变[98]。由此可以提出p400针对DSB的修复模型，如图1.3所示。图1.3p400调控HR和NHEJ模型图[98]p400的缺失会使DSB修复转向NHEJ，短片段的删除仍旧使用经典的NHEJ途径，一旦出现长片段的删除，修复途径转向容易出错的AltEJ，出现遗传不稳定。Figure1.3p400regulationofHRandNHEJmodelDeletionofp400willcauseDSBrepairtoswitchtoNHEJ.ThedeletionofshortfragmentsstillusestheclassicNHEJapproach.Oncethedeletionoflongsegmentsoccurs,therepairapproachshiftstoerror-proneAltEJandgeneticinstabilityoccurs.
本文编号：3428286
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