犬莱姆病ELISA方法建立及OspA嵌合VLPs构建和免疫原性研究
发布时间：2021-10-10 18:53
莱姆病（Lyme disease）是由蜱传播的自然疫源性疾病。该病的典型临床症状为游走性红斑,主要侵害心脏、关节、神经,一旦感染,会对机体造成不可逆性损伤。小型哺乳类动物是蜱虫的主要宿主。随着经济发展,人与宠物的频繁接触增加了人患莱姆病的潜在风险,使得莱姆病成为全球广泛关注的人兽共患病。由于莱姆病的临床表现复杂多样,病原体分离困难且耗时长,因此该病常不能被及时确诊,进而错过最佳治疗时间。目前,该病的检测方法常选用出现时间早、抗原性强、持续性久的菌体蛋白作为检测抗原,但这些菌体蛋白存在一定的异质性,易造成检测效果不佳,对我国莱姆病的预防和控制极为不利。因此,根据我国的实际流行情况,建立与流行致病基因型相匹配的检测方法刻不容缓。在预防莱姆病的过程中,疫苗免疫是预防莱姆病最有效的方式,但国际上至今无人用商品化疫苗来预防莱姆病。当前,莱姆病疫苗的研制主要集中在全菌疫苗、亚单位疫苗等,这些疫苗的安全性差、免疫原性低,因此围绕绿色环保理念,研发安全高效的莱姆病新型疫苗已迫在眉睫。针对以上问题,本研究旨在建立用于检测犬莱姆病的间接ELISA方法,以期为我国犬莱姆病检测提供一种快速、有效的临床诊断方法...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
典型螺旋体；（B）伯氏疏螺旋体[17]
第一篇文献综述第1章伯氏疏螺旋体概述11图2伯氏疏螺旋体的防控策略[34]Figure2PreventionandcontrolstrategiesofBorreliaburgdorferi1.2.5莱姆病疫苗的研究进展莱姆病的发生严重危害了国际公共卫生的健康发展，而疫苗的研发有助于该病情的预防与控制[57]，因此研制莱姆病新型疫苗迫在眉睫。当前无人用的商品化莱姆病疫苗，仅有一种含OspA的莱姆病疫苗（VLA15）进入临床试验阶段[34]。从动物源头预防莱姆病可能是阻止莱姆病蔓延的最佳方式之一。一方面，兽用莱姆病疫苗会切断一部分传染源，降低了人患莱姆病的风险，另一方面，兽用疫苗只对动物免疫，避免了人用疫苗对机体造成的副作用，因此，兽用莱姆病疫苗对莱姆病的预防有极为重要的作用。目前，美国已批准了几种犬用莱姆病疫苗，但大多数犬用莱姆病疫苗是全菌疫苗，全菌疫苗中含有多种未知的菌体蛋白，会对机体产生很大的副作用，同时干扰后续的诊断结果。并且有研究表明，莱姆病疫苗在犬体内的有效程度会因外界因素的变化而导致高度可变[44]，因此研制兽用莱姆病疫苗仍处于十分严峻的的形势。当前，研制的疫苗主要包括全菌疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗等。全菌疫苗采用直接灭活菌体的方法研制，由于大量菌体蛋白的刺激，会对机体产生许多无法控制的副作用，一般不推荐使用在人用莱姆疫苗中。早期莱姆病疫苗会通过基因工程手段构建出DNA疫苗，但DNA疫苗会在机体内持续复制增殖，对机体产生了潜在的危害。亚单位疫苗多采用莱姆病抗原性较强的蛋
第一篇文献综述第2章病毒样颗粒概述14图3不同病毒样颗粒的结构示意图[66]Figure3Schematicdiagramofdifferentvirus-likeparticles病毒样颗粒疫苗的制备首先要考虑的是免疫原性，其次是蛋白的加工、翻译、修饰及其表达量，最后还需要考虑影响生产成本的下游纯化技术。VLPs主要有四大表达系统，分别是细菌表达系统、酵母表达系统、昆虫杆状病毒表达系统和哺乳动物表达系统。此外，植物表达系统、活生物（如桑蚕蛹）以及无细胞表达系统也应运而生[68-70]。细菌表达系统主要是利用工程菌（大肠杆菌）原核表达病毒样颗粒，通过密码子优化等方式表达出适应细菌的蛋白，以期获得成本低、蛋白产量高的VLPs[71]，但该方法无法翻译、折叠蛋白，且表达出来的蛋白常常属于不可溶性蛋白，往往会对下游纯化造成困难[72]，在变性到复性的过程中也会影响蛋白本身的空间构象，因此，该方法是生产无囊膜的单衣壳VLPs的主要选择[73]。酵母表达系统可表达单一或多个结构蛋白的VLPs，该表达系统生产的蛋白虽可被加工、翻译、修饰，但该表达系统与细菌表达系统相比，其生产过程更为复杂且产量不高。哺乳动物表达系统与酵母表达系统的优势相似，但是与酵母表达系统相比，蛋白的后期加工更好，表达程序更为简单，产量更多。然而，在蛋白表达量方面仍无法与细菌表达系统相提并论。昆虫杆状病毒表达系统基本具备以上表达系统的优势，既适用于无囊膜VLPs也适用于有囊膜VLPs[74-76]。该系统可以进行加工、翻译、修饰等过程，因此能表达一个或多个结构蛋白。该系统的表达程序简单，生产周期短，常应用于变异度高的病毒（如流感病毒）[77-80]，以期在一定程度上降低疾病的传播风险。同时，昆虫杆状病毒主要感染节肢动物，不感染哺乳类动物，因此对动物的安全性也提供了保
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪O型口蹄疫病毒样颗粒的构建及鉴定[J]. 刘汉平. 中国畜牧兽医. 2019(11)
[2]通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备[J]. 刘静,任志广,王铁成,李元果,孙伟洋,冯娜,秦川,高玉伟,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2019(07)
[3]含伯氏疏螺旋体OspA、OspC蛋白VLPs的构建及鉴定[J]. 于喜冰,李俊姣,常瑾,费亦东,穆佳琦,丁佳欣,李金斗,丁壮,尹仁福. 中国兽医学报. 2019(07)
[4]病毒样颗粒疫苗及其在禽病防控中的应用[J]. 陈秀琴,郑敏,黄梅清,陈少莺. 中国兽医学报. 2018(11)
[5]野外军事行动中莱姆病流行病学调查与防治研究[J]. 杨新民,陈芦斌,王晓坤,刘增加,李书明,夏春雷,何存胜. 解放军预防医学杂志. 2018(10)
[6]吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达[J]. 冯嘉轩,杨莹莹,李俊姣,阎慧. 中国兽医学报. 2017(11)
[7]新城疫病毒样颗粒对树突状细胞成熟的影响[J]. 丁佳欣,钱晶,徐小洪,李金斗,秦岭松,黄蕾,武淑婷,丁伟,尹仁福,丁壮. 中国兽医学报. 2017(08)
[8]GPI锚定蛋白介导嵌合新城疫病毒样颗粒的组装[J]. 李金斗,钱晶,丁佳欣,徐小洪,秦岭松,黄蕾,武淑婷,丁伟,尹仁福,丁壮. 中国兽医学报. 2017(06)
[9]牛伯氏疏螺旋体感染的间接ELISA检测方法的建立[J]. 梅琳,王慧煜,李佳,吴绍强,林祥梅,关贵全,郝琴,韩雪清. 中国兽医科学. 2017(05)
[10]病毒样颗粒疫苗的生产及其在临床应用中的研究进展[J]. 赵增阳,王勤,王延东,刘超,许进,李奥. 现代预防医学. 2017(05)
本文编号：3428959
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
典型螺旋体；（B）伯氏疏螺旋体[17]
第一篇文献综述第1章伯氏疏螺旋体概述11图2伯氏疏螺旋体的防控策略[34]Figure2PreventionandcontrolstrategiesofBorreliaburgdorferi1.2.5莱姆病疫苗的研究进展莱姆病的发生严重危害了国际公共卫生的健康发展，而疫苗的研发有助于该病情的预防与控制[57]，因此研制莱姆病新型疫苗迫在眉睫。当前无人用的商品化莱姆病疫苗，仅有一种含OspA的莱姆病疫苗（VLA15）进入临床试验阶段[34]。从动物源头预防莱姆病可能是阻止莱姆病蔓延的最佳方式之一。一方面，兽用莱姆病疫苗会切断一部分传染源，降低了人患莱姆病的风险，另一方面，兽用疫苗只对动物免疫，避免了人用疫苗对机体造成的副作用，因此，兽用莱姆病疫苗对莱姆病的预防有极为重要的作用。目前，美国已批准了几种犬用莱姆病疫苗，但大多数犬用莱姆病疫苗是全菌疫苗，全菌疫苗中含有多种未知的菌体蛋白，会对机体产生很大的副作用，同时干扰后续的诊断结果。并且有研究表明，莱姆病疫苗在犬体内的有效程度会因外界因素的变化而导致高度可变[44]，因此研制兽用莱姆病疫苗仍处于十分严峻的的形势。当前，研制的疫苗主要包括全菌疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗等。全菌疫苗采用直接灭活菌体的方法研制，由于大量菌体蛋白的刺激，会对机体产生许多无法控制的副作用，一般不推荐使用在人用莱姆疫苗中。早期莱姆病疫苗会通过基因工程手段构建出DNA疫苗，但DNA疫苗会在机体内持续复制增殖，对机体产生了潜在的危害。亚单位疫苗多采用莱姆病抗原性较强的蛋
第一篇文献综述第2章病毒样颗粒概述14图3不同病毒样颗粒的结构示意图[66]Figure3Schematicdiagramofdifferentvirus-likeparticles病毒样颗粒疫苗的制备首先要考虑的是免疫原性，其次是蛋白的加工、翻译、修饰及其表达量，最后还需要考虑影响生产成本的下游纯化技术。VLPs主要有四大表达系统，分别是细菌表达系统、酵母表达系统、昆虫杆状病毒表达系统和哺乳动物表达系统。此外，植物表达系统、活生物（如桑蚕蛹）以及无细胞表达系统也应运而生[68-70]。细菌表达系统主要是利用工程菌（大肠杆菌）原核表达病毒样颗粒，通过密码子优化等方式表达出适应细菌的蛋白，以期获得成本低、蛋白产量高的VLPs[71]，但该方法无法翻译、折叠蛋白，且表达出来的蛋白常常属于不可溶性蛋白，往往会对下游纯化造成困难[72]，在变性到复性的过程中也会影响蛋白本身的空间构象，因此，该方法是生产无囊膜的单衣壳VLPs的主要选择[73]。酵母表达系统可表达单一或多个结构蛋白的VLPs，该表达系统生产的蛋白虽可被加工、翻译、修饰，但该表达系统与细菌表达系统相比，其生产过程更为复杂且产量不高。哺乳动物表达系统与酵母表达系统的优势相似，但是与酵母表达系统相比，蛋白的后期加工更好，表达程序更为简单，产量更多。然而，在蛋白表达量方面仍无法与细菌表达系统相提并论。昆虫杆状病毒表达系统基本具备以上表达系统的优势，既适用于无囊膜VLPs也适用于有囊膜VLPs[74-76]。该系统可以进行加工、翻译、修饰等过程，因此能表达一个或多个结构蛋白。该系统的表达程序简单，生产周期短，常应用于变异度高的病毒（如流感病毒）[77-80]，以期在一定程度上降低疾病的传播风险。同时，昆虫杆状病毒主要感染节肢动物，不感染哺乳类动物，因此对动物的安全性也提供了保
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪O型口蹄疫病毒样颗粒的构建及鉴定[J]. 刘汉平. 中国畜牧兽医. 2019(11)
[2]通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备[J]. 刘静,任志广,王铁成,李元果,孙伟洋,冯娜,秦川,高玉伟,夏咸柱. 中国病原生物学杂志. 2019(07)
[3]含伯氏疏螺旋体OspA、OspC蛋白VLPs的构建及鉴定[J]. 于喜冰,李俊姣,常瑾,费亦东,穆佳琦,丁佳欣,李金斗,丁壮,尹仁福. 中国兽医学报. 2019(07)
[4]病毒样颗粒疫苗及其在禽病防控中的应用[J]. 陈秀琴,郑敏,黄梅清,陈少莺. 中国兽医学报. 2018(11)
[5]野外军事行动中莱姆病流行病学调查与防治研究[J]. 杨新民,陈芦斌,王晓坤,刘增加,李书明,夏春雷,何存胜. 解放军预防医学杂志. 2018(10)
[6]吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达[J]. 冯嘉轩,杨莹莹,李俊姣,阎慧. 中国兽医学报. 2017(11)
[7]新城疫病毒样颗粒对树突状细胞成熟的影响[J]. 丁佳欣,钱晶,徐小洪,李金斗,秦岭松,黄蕾,武淑婷,丁伟,尹仁福,丁壮. 中国兽医学报. 2017(08)
[8]GPI锚定蛋白介导嵌合新城疫病毒样颗粒的组装[J]. 李金斗,钱晶,丁佳欣,徐小洪,秦岭松,黄蕾,武淑婷,丁伟,尹仁福,丁壮. 中国兽医学报. 2017(06)
[9]牛伯氏疏螺旋体感染的间接ELISA检测方法的建立[J]. 梅琳,王慧煜,李佳,吴绍强,林祥梅,关贵全,郝琴,韩雪清. 中国兽医科学. 2017(05)
[10]病毒样颗粒疫苗的生产及其在临床应用中的研究进展[J]. 赵增阳,王勤,王延东,刘超,许进,李奥. 现代预防医学. 2017(05)
本文编号：3428959
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