乳糖酸胁迫对金黄色葡萄球菌生物膜的影响
发布时间：2021-11-21 08:35
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是食源性病原菌中研究的焦点,具有可以形成生物膜的能力,其被膜菌群体耐药性极强并难以彻底清除,对食品工业生产影响极大。乳糖酸（Lactobionic acid,LBA）被归类为一种在自然界中较少见的仿生酸,由结合到半乳糖上的多羟基葡萄糖醛酸组成,如今以其抗氧化性、抗菌性、螯合、稳定、酸化作用及抑菌性而闻名,是一种多用途的食品添加剂。为进一步研究乳糖酸的生物膜抑制特性,本课题研究乳糖酸对S.aureus生物膜的作用效果及作用机制。主要结果如下:（1）通过结晶紫染色鉴定生物膜的黏附能力发现,24 h的生物膜的粘附形态为体积较小的细菌簇,局部可见依旧散落的单个菌体。随着培养时间达到3 d,盖玻片表面的紫色菌团量开始增多,生物膜面积也逐渐增大,呈现致密且均匀的片状结构,生物膜内活菌数达到最大,活性较好。7 d的样本发现当生物膜积累到一定厚度,会发生不同程度的脱落与局部解离。（2）乳糖酸对S.aureus的MIC值为8 mg/mL,MBC值为32 mg/mL,对S.aureus生物膜的MBIC值为16 mg/mL,MBB...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
S.aureus生物膜形成模型示意图
2乳糖酸对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响16分析，以P＜0.01表示差异极显著，0.01＜P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。2.3结果与分析2.3.1金黄色葡萄球菌生物膜形成能力鉴定将实验菌株接种于刚果红平板，可通过菌落颜色变化鉴定生物膜的形成。37℃孵育24h后，大多数的菌落观察呈红色或暗褐色，部分菌落几乎显示为黑色。室温下静置24h后，观察发现大多数S.aureus菌落呈黑色、干燥、光亮的表面特性，菌落四周产生透明圈，红色明显减少，证明该菌株为PIA阳性菌株，可产生生物膜。图2-1S.aureus生物膜形成能力刚果红鉴定Fig.2-1TheabilityofS.aureusbiofilmformationtestedbyCongoRedagar2.3.2金黄色葡萄球菌黏附过程鉴定由于结晶紫可以与菌体中的DNA结合从而使核区被染成紫色，因而通过结晶紫染色可以观察S.aureus生物膜形成的粘附情况。24-孔板培养物结晶紫染色的试验结果表明（图2-2）培养时间24h的载体表面较为均匀附着了体积较小的细菌簇，局部可见依旧散落的单个菌体，部分区域凝聚成小的菌团，随着培养时间达到2d及3d，盖玻片表面的紫色菌团区域数量开始增多，且面积也逐渐增大，附着细菌量逐渐增多（图2-2A、B、C），4d-6d生物膜呈现致密且均匀的片状膜，随着厚度提高透光度大大降低（图2-2D、E、F）。培养7d的生物膜染色结果发现局部区域呈现紫色团块的缺失，这可能与生物膜成熟后的传播阶段有关，当生物膜积累到一定厚度，会发生不同程度的脱落与解离，解离后的分散菌体会继续定植于新的载体表面（图2-2G1、G2）。
沈阳农业大学硕士论文17图2-2Fig.2-2IdentificationofS.aureusadhesionbycrystal-violetstaining(A-Grepresentedbiofilmsamplesfor1-7days)2.3.3金黄色葡萄球菌生物膜形成过程鉴定银染法可以与蛋白质结合，使暴露的蛋白质呈现黑色，因此可以观察生物膜组织中胞外蛋白的分布，在24-孔板中培养1、3及7d的盖玻片载体取出后通过银染处理出现了不同程度的网状或团块状黑色组织（图2-3）。培养1d生物膜形成仍属于初期阶段，生物膜生长十分均匀。培养3d的生物膜样本染色后黑色网状团块的量更多，结构更加紧凑致密。培养至7d，积累的黑色团块颜色更深代表积累的生物膜的量更多，而染色区域非常不均匀，出现由于成熟生物膜脱落而造成的区域性空白。图2-3银染法鉴定S.aureus生物膜形成情况（A-C分别代表1、3、7d的生物膜样本）Fig.2-3IdentificationofS.aureusbiofilmformationbysilverstaining(A-Crepresentsbiofilmsamplesof1,3,7days)2.3.4金黄色葡萄球菌生物膜内活菌数的变化盖玻片载体表面生物膜的膜内活菌数的结果绘制的生长曲线如图2-4。生物膜生长初期24h内，S.aureus浮游菌由于营养物质丰富而大量繁殖，并且不断向盖玻片表面附
【参考文献】：
期刊论文
[1]涂膜保鲜剂中添加乳糖酸对冷鲜肉的保鲜效果[J]. 高立红,郑艳. 食品工业科技. 2018(14)
[2]影响食品安全的因素及保障措施研究[J]. 郭蓉. 中国现代药物应用. 2014(16)
[3]氨溴索对表皮葡萄球菌生物被膜胞间多糖黏附素及其调控基因作用的体外研究[J]. 廖欣,余加林,艾青. 中国抗生素杂志. 2013(11)
[4]银染法观察大肠杆菌生物被膜变化初探[J]. 梁俐,王成玉,邹龙涛,廖蕴华. 内科. 2012(02)
[5]槐糖脂对金黄色葡萄球菌的抑菌机理[J]. 胡静,赵小慧,朱春玉,胡风庆,回晶. 食品科学. 2012(05)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌生物被膜和纤维蛋白原结合能力研究[D]. 游轶博.中国科学技术大学 2014
硕士论文
[1]鱼精蛋白对金黄色葡萄球菌生物膜干预作用的初步研究[D]. 娄凡丽.华中农业大学 2014
[2]甘草提取物对变异链球菌F-ATP酶作用的初步研究[D]. 吴妮娅.四川大学 2007
本文编号：3509154
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
S.aureus生物膜形成模型示意图
2乳糖酸对金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响16分析，以P＜0.01表示差异极显著，0.01＜P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。2.3结果与分析2.3.1金黄色葡萄球菌生物膜形成能力鉴定将实验菌株接种于刚果红平板，可通过菌落颜色变化鉴定生物膜的形成。37℃孵育24h后，大多数的菌落观察呈红色或暗褐色，部分菌落几乎显示为黑色。室温下静置24h后，观察发现大多数S.aureus菌落呈黑色、干燥、光亮的表面特性，菌落四周产生透明圈，红色明显减少，证明该菌株为PIA阳性菌株，可产生生物膜。图2-1S.aureus生物膜形成能力刚果红鉴定Fig.2-1TheabilityofS.aureusbiofilmformationtestedbyCongoRedagar2.3.2金黄色葡萄球菌黏附过程鉴定由于结晶紫可以与菌体中的DNA结合从而使核区被染成紫色，因而通过结晶紫染色可以观察S.aureus生物膜形成的粘附情况。24-孔板培养物结晶紫染色的试验结果表明（图2-2）培养时间24h的载体表面较为均匀附着了体积较小的细菌簇，局部可见依旧散落的单个菌体，部分区域凝聚成小的菌团，随着培养时间达到2d及3d，盖玻片表面的紫色菌团区域数量开始增多，且面积也逐渐增大，附着细菌量逐渐增多（图2-2A、B、C），4d-6d生物膜呈现致密且均匀的片状膜，随着厚度提高透光度大大降低（图2-2D、E、F）。培养7d的生物膜染色结果发现局部区域呈现紫色团块的缺失，这可能与生物膜成熟后的传播阶段有关，当生物膜积累到一定厚度，会发生不同程度的脱落与解离，解离后的分散菌体会继续定植于新的载体表面（图2-2G1、G2）。
沈阳农业大学硕士论文17图2-2Fig.2-2IdentificationofS.aureusadhesionbycrystal-violetstaining(A-Grepresentedbiofilmsamplesfor1-7days)2.3.3金黄色葡萄球菌生物膜形成过程鉴定银染法可以与蛋白质结合，使暴露的蛋白质呈现黑色，因此可以观察生物膜组织中胞外蛋白的分布，在24-孔板中培养1、3及7d的盖玻片载体取出后通过银染处理出现了不同程度的网状或团块状黑色组织（图2-3）。培养1d生物膜形成仍属于初期阶段，生物膜生长十分均匀。培养3d的生物膜样本染色后黑色网状团块的量更多，结构更加紧凑致密。培养至7d，积累的黑色团块颜色更深代表积累的生物膜的量更多，而染色区域非常不均匀，出现由于成熟生物膜脱落而造成的区域性空白。图2-3银染法鉴定S.aureus生物膜形成情况（A-C分别代表1、3、7d的生物膜样本）Fig.2-3IdentificationofS.aureusbiofilmformationbysilverstaining(A-Crepresentsbiofilmsamplesof1,3,7days)2.3.4金黄色葡萄球菌生物膜内活菌数的变化盖玻片载体表面生物膜的膜内活菌数的结果绘制的生长曲线如图2-4。生物膜生长初期24h内，S.aureus浮游菌由于营养物质丰富而大量繁殖，并且不断向盖玻片表面附
【参考文献】：
期刊论文
[1]涂膜保鲜剂中添加乳糖酸对冷鲜肉的保鲜效果[J]. 高立红,郑艳. 食品工业科技. 2018(14)
[2]影响食品安全的因素及保障措施研究[J]. 郭蓉. 中国现代药物应用. 2014(16)
[3]氨溴索对表皮葡萄球菌生物被膜胞间多糖黏附素及其调控基因作用的体外研究[J]. 廖欣,余加林,艾青. 中国抗生素杂志. 2013(11)
[4]银染法观察大肠杆菌生物被膜变化初探[J]. 梁俐,王成玉,邹龙涛,廖蕴华. 内科. 2012(02)
[5]槐糖脂对金黄色葡萄球菌的抑菌机理[J]. 胡静,赵小慧,朱春玉,胡风庆,回晶. 食品科学. 2012(05)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌生物被膜和纤维蛋白原结合能力研究[D]. 游轶博.中国科学技术大学 2014
硕士论文
[1]鱼精蛋白对金黄色葡萄球菌生物膜干预作用的初步研究[D]. 娄凡丽.华中农业大学 2014
[2]甘草提取物对变异链球菌F-ATP酶作用的初步研究[D]. 吴妮娅.四川大学 2007
本文编号：3509154
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