高花青素毛状根生物反应器的创制
发布时间：2021-12-16 13:48
花青素是一类广泛存在于被子植物及少数裸子植物细胞液中的水溶性色素。因其特殊的化学结构,在不同酸碱性条件下能够使植物器官呈现不同的颜色如粉红、天蓝、紫色等。花青素属于黄酮类物质,具有抗癌、抗炎抗菌、抗衰老、降血糖、保护肝脏等功效。花青素主要在植物的花、果实、块茎中积累,然而目前主要来源于产量较高的水果和蔬菜中(黑枸杞、蓝莓、葡萄、黑加仑、紫甘薯、红甘蓝等)来源较为单一。从更多的植物中获取花青素成为了扩充花青素资源库的有效手段。本研究拟通过在植物毛状根中过量表达调控花青素合成代谢的MYB和bHLH基因,获得高花青素的生物反应器,并对获得花青素的种类进行验证。实验结果如下：1、Gateway技术构建调控花青素合成代谢的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL的遍在表达载体,利用电转法将表达载体转至发根农杆菌Ar1193中。通过发根农杆菌介导转基因法侵染烟草及大牵牛叶片使AmROS和AmDEL在毛状根中过表达,获得高花青素毛状根,其转化率为40%,在’Samsun’烟草的毛状根中花青素占干重的1.46%。2、利用并通过高效液相-质谱联用仪分析了毛状根中花青素的种类。毛状根中花青素化合物种...
【文章来源】： 青海师范大学青海省
【文章页数】：91 页
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号或缩略词说明
前言
第一章 文献综述
1.1 花青素简述
1.1.1 花青素的化学结构
1.1.2 花青素的光学效应和稳定性
1.1.3 影响花青素稳定性的因素
1.1.4 花青素的作用
1.1.5 花青素的药理作用及营养价值
1.1.5.1 抗癌作用
1.1.5.2 抗炎、抗菌作用
1.1.5.3 降高血糖、高血脂的作用
1.1.5.4 保护肝脏
1.1.5.5 抗衰老
1.1.5.6 提高记忆力
1.2 花青素的生物合成途径
1.3 花青素合成途径的结构基因
1.4 植物中花青素合成代谢的分子机理
1.5 大牵牛（天堂蓝）
1.6 发根农杆菌
1.6.1 发根农杆菌的生物学特性
1.6.2 发根农杆菌的Ri质粒及Ri质粒载体
1.7 毛状根
1.7.1 发根农杆菌诱导植物形成毛状根的机制
1.7.2 发根农杆菌转化植物产生毛状根的方法
1.7.3 毛状根的培养
1.7.4 影响发根农杆菌感染的因素
1.7.5 利用毛状根生产次生代谢产物
1.7.6 利用毛状根合成高含量的花青素
第二章 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂及菌株
2.2 实验方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 提取烟草毛状根RNA
2.2.3 RNA反转录
2.2.4 加A
2.2.5 DNA回收
2.2.6 pGEM?-T Easy载体链接
2.2.7 链接产物做DH5 α（E.coli细胞）转化
2.2.8 重组克隆的筛选
2.2.9 穿刺
2.2.10 送样测序
2.2.11 摇菌扩大培养
2.2.12 提质粒
2.2.13 BP反应
2.2.14 菌落阳性筛选
2.2.15 LR反应
2.2.16 电转化农杆菌Ar1193
2.2.17 培养、保存转化好的农杆菌
2.2.18 培养无菌苗
2.2.19 农杆菌侵染烟草
2.2.20 扩大培养毛状根
2.2.21 QRT-PCR检测调控花青素合成的结构基因表达量
第三章 实验结果
3.1 RNA提取检测结果
3.2 反转录加A后PCR结果
3.3 DNA回收结果
3.4 T载体链接产物做DH5 α（E.coli）细胞转化
3.5 T载体连接转化DH5 α,质粒提取结果
3.6 BP反应后转化DH5 α
3.7 BP反应后转化DH5 α,提取质粒结果
3.8 LR反应后转化DH5 α
3.9 LR反应后转化DH5 α,提取质粒结果
3.10 电转化农杆菌Ar1193
3.11 农杆菌侵染烟草
3.11.1 诱导毛状根结果
3.11.2 扩大培养后的毛状根
3.11.3 检测MYB基因,bHLH基因
3.11.4 调控花青素生物合成的结构基因表达谱
3.11.5 转基因型烟草毛状根与野生型烟草花中花青素的量及化合物种类比较
3.11.6 大牵牛“天堂蓝”毛状根与花中花青素类化合物比较
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附图
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物花青素生物合成转录调控研究进展 [J]. 梁平,宋洪元. 南方农业学报. 2014(08)
[2]原花青素对脑缺血再灌注损伤羟自由基含量和肿瘤坏死因子-α表达影响 [J]. 翟婷婷,蔡红艳,云爱华. 中国实用医药. 2014(22)
[3]七彩红竹二氢黄酮醇4-还原酶基因IhDFR1的克隆及表达分析 [J]. 缪福俊,陈剑,孙浩,王毅,王晨晨,原晓龙,杨宇明,王娟. 植物生理学报. 2014(04)
[4]发根农杆菌R1000菌株对抗生素抗性反应及毛状根诱导影响研究 [J]. 黄淑燕,郑郁善. 福建林业. 2014(01)
[5]桑树查尔酮异构酶基因的克隆与原核表达分析 [J]. 刘长英,赵爱春,李军,吕蕊花,余亚圣,王茜龄,鲁成,余茂德. 林业科学. 2013(02)
[6]茶树类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆和表达分析 [J]. 王晓帆,田艳维,王云生,高丽萍,夏涛. 茶叶科学. 2012(05)
[7]滁菊类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及分子特性 [J]. 蔡华,许雪峰,诸立新,孙艳辉,代洪亮,崔勇. 食品科学. 2012(17)
[8]发根农杆菌菌株和烟草品种对毛状根诱导率的影响 [J]. 黄丽萍,唐瑶,江龙. 山地农业生物学报. 2012(04)
[9]紫甘薯花青素提取工艺及抑菌活性的研究 [J]. 古荣鑫,胡花丽,刘雨辰,周杰,李鹏霞,朱树华. 山东农业科学. 2012(04)
[10]紫甘薯花青素对LPS致炎小鼠学习记忆能力的保护作用 [J]. 孙晓,王正,阮杰,王晓慧,郑元林. 医学研究杂志. 2011(11)
硕士论文
[1]紫色作物花色苷的分离鉴定及抗病毒机理的初探[D]. 雷用东.石河子大学. 2013
[2]紫甘薯色素纯化及其对糖尿病鼠的抗氧化作用[D]. 范辉.天津科技大学. 2009
[3]发根农杆菌对蓝猪耳的遗传转化及其毛状根再生植株的初步研究[D]. 陶均.华南师范大学. 2004
本文编号：3538242
【文章来源】： 青海师范大学青海省
【文章页数】：91 页
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号或缩略词说明
前言
第一章 文献综述
1.1 花青素简述
1.1.1 花青素的化学结构
1.1.2 花青素的光学效应和稳定性
1.1.3 影响花青素稳定性的因素
1.1.4 花青素的作用
1.1.5 花青素的药理作用及营养价值
1.1.5.1 抗癌作用
1.1.5.2 抗炎、抗菌作用
1.1.5.3 降高血糖、高血脂的作用
1.1.5.4 保护肝脏
1.1.5.5 抗衰老
1.1.5.6 提高记忆力
1.2 花青素的生物合成途径
1.3 花青素合成途径的结构基因
1.4 植物中花青素合成代谢的分子机理
1.5 大牵牛（天堂蓝）
1.6 发根农杆菌
1.6.1 发根农杆菌的生物学特性
1.6.2 发根农杆菌的Ri质粒及Ri质粒载体
1.7 毛状根
1.7.1 发根农杆菌诱导植物形成毛状根的机制
1.7.2 发根农杆菌转化植物产生毛状根的方法
1.7.3 毛状根的培养
1.7.4 影响发根农杆菌感染的因素
1.7.5 利用毛状根生产次生代谢产物
1.7.6 利用毛状根合成高含量的花青素
第二章 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂及菌株
2.2 实验方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 提取烟草毛状根RNA
2.2.3 RNA反转录
2.2.4 加A
2.2.5 DNA回收
2.2.6 pGEM?-T Easy载体链接
2.2.7 链接产物做DH5 α（E.coli细胞）转化
2.2.8 重组克隆的筛选
2.2.9 穿刺
2.2.10 送样测序
2.2.11 摇菌扩大培养
2.2.12 提质粒
2.2.13 BP反应
2.2.14 菌落阳性筛选
2.2.15 LR反应
2.2.16 电转化农杆菌Ar1193
2.2.17 培养、保存转化好的农杆菌
2.2.18 培养无菌苗
2.2.19 农杆菌侵染烟草
2.2.20 扩大培养毛状根
2.2.21 QRT-PCR检测调控花青素合成的结构基因表达量
第三章 实验结果
3.1 RNA提取检测结果
3.2 反转录加A后PCR结果
3.3 DNA回收结果
3.4 T载体链接产物做DH5 α（E.coli）细胞转化
3.5 T载体连接转化DH5 α,质粒提取结果
3.6 BP反应后转化DH5 α
3.7 BP反应后转化DH5 α,提取质粒结果
3.8 LR反应后转化DH5 α
3.9 LR反应后转化DH5 α,提取质粒结果
3.10 电转化农杆菌Ar1193
3.11 农杆菌侵染烟草
3.11.1 诱导毛状根结果
3.11.2 扩大培养后的毛状根
3.11.3 检测MYB基因,bHLH基因
3.11.4 调控花青素生物合成的结构基因表达谱
3.11.5 转基因型烟草毛状根与野生型烟草花中花青素的量及化合物种类比较
3.11.6 大牵牛“天堂蓝”毛状根与花中花青素类化合物比较
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附图
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物花青素生物合成转录调控研究进展 [J]. 梁平,宋洪元. 南方农业学报. 2014(08)
[2]原花青素对脑缺血再灌注损伤羟自由基含量和肿瘤坏死因子-α表达影响 [J]. 翟婷婷,蔡红艳,云爱华. 中国实用医药. 2014(22)
[3]七彩红竹二氢黄酮醇4-还原酶基因IhDFR1的克隆及表达分析 [J]. 缪福俊,陈剑,孙浩,王毅,王晨晨,原晓龙,杨宇明,王娟. 植物生理学报. 2014(04)
[4]发根农杆菌R1000菌株对抗生素抗性反应及毛状根诱导影响研究 [J]. 黄淑燕,郑郁善. 福建林业. 2014(01)
[5]桑树查尔酮异构酶基因的克隆与原核表达分析 [J]. 刘长英,赵爱春,李军,吕蕊花,余亚圣,王茜龄,鲁成,余茂德. 林业科学. 2013(02)
[6]茶树类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆和表达分析 [J]. 王晓帆,田艳维,王云生,高丽萍,夏涛. 茶叶科学. 2012(05)
[7]滁菊类黄酮3′-羟化酶基因的克隆及分子特性 [J]. 蔡华,许雪峰,诸立新,孙艳辉,代洪亮,崔勇. 食品科学. 2012(17)
[8]发根农杆菌菌株和烟草品种对毛状根诱导率的影响 [J]. 黄丽萍,唐瑶,江龙. 山地农业生物学报. 2012(04)
[9]紫甘薯花青素提取工艺及抑菌活性的研究 [J]. 古荣鑫,胡花丽,刘雨辰,周杰,李鹏霞,朱树华. 山东农业科学. 2012(04)
[10]紫甘薯花青素对LPS致炎小鼠学习记忆能力的保护作用 [J]. 孙晓,王正,阮杰,王晓慧,郑元林. 医学研究杂志. 2011(11)
硕士论文
[1]紫色作物花色苷的分离鉴定及抗病毒机理的初探[D]. 雷用东.石河子大学. 2013
[2]紫甘薯色素纯化及其对糖尿病鼠的抗氧化作用[D]. 范辉.天津科技大学. 2009
[3]发根农杆菌对蓝猪耳的遗传转化及其毛状根再生植株的初步研究[D]. 陶均.华南师范大学. 2004
本文编号：3538242
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