隆线溞和老年低额溞几丁质酶重组蛋白的抗体制备与应用
发布时间：2021-12-24 06:03
为高效生产特异性抗体,利用已知基因序列设计好的引物RT-PCR直接扩增出了隆线溞Daphnia carinata和老年低额溞Simocephalus vetulus几丁质酶（chitinase,EC 3.2.1.14）基因序列全长（隆线溞1149bp,老年低额溞1086bp）。然后通过双酶切几丁质酶基因和pCold表达载体并将两者连接,构建出重组表达载体。重组载体转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导培养后得到了两种生物的重组几丁质酶蛋白。将重组几丁质酶蛋白经过纯化处理后作为抗原,免疫新西兰白兔,最终分别得到效价约1:158000和1:134000的兔抗重组隆线溞和老年低额溞几丁质酶多克隆抗体。应用间接非竞争ELISA方法对于抗原抗体最适反应浓度进行了测量。其中,隆线溞几丁质酶抗体的最适稀释倍数为1:16000(浓度4.75×10-5mg·mL-1),测定重组几丁质酶的标准曲线为y=1.4711×(1-e-1.5431x)(R=0.9892,S=0.0915,最低检测限24.1 ng·mL-1);老年...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
隆线溞
老年低额溞
浙江大学硕士学位论文绪论71.2.3中华薄壳介中华薄壳介，分类为动物界Animalia、节肢动物门Arthropoda、甲壳纲Crustacea、介形亚纲Ostracoda、速足目Podocopida、腺状介虫科Cyprididae、薄壳介属Dolerocypris，壳薄而透明，呈淡绿色或淡棕绿色。侧面观呈覆舟状，背缘中部最高，向两端缓缓倾斜，腹缘直；背面观呈纺锤形，狭长，两端尖。介形虫类（Ostracode）作为地球上最古老的的生物之一（Schnetal.,2016），一直延续至今，在水体、陆地上均有分布（禹娜，2005），过去主要应用于地质学研究中，在生物学领域的研究甚少，但作为一类新兴的实验动物，正逐渐受到人们的关注（Niyommaneeratetal.,2017）。图1.5中华薄壳介1.3抗原和抗体的制备1.3.1抗原的制备为获得能够特异性识别某个物种的几丁质酶抗体，需要先根据目标物种提取出抗原蛋白，根据现有的研究，有三种获得抗原的方法可供选择。（1）直接从目标生物体内提取出酶，经过纯化后将电泳纯的酶作为抗原。此方法优势在于获取酶源容易，但缺点是分离纯化的过程繁琐，对酶的纯度要求很高，且每次制备抗体时都需要重新提取酶，工作量大；（2）根据目标酶已知的基因序列通过序列比对后挑选特异性序列合成多肽作为抗原。多肽蛋白序列较短，生产效率高，能通过NCBI中公开的物种基因序列和蛋白序列，筛选出特异性较高的序列，减少相
本文编号：3549949
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
隆线溞
老年低额溞
浙江大学硕士学位论文绪论71.2.3中华薄壳介中华薄壳介，分类为动物界Animalia、节肢动物门Arthropoda、甲壳纲Crustacea、介形亚纲Ostracoda、速足目Podocopida、腺状介虫科Cyprididae、薄壳介属Dolerocypris，壳薄而透明，呈淡绿色或淡棕绿色。侧面观呈覆舟状，背缘中部最高，向两端缓缓倾斜，腹缘直；背面观呈纺锤形，狭长，两端尖。介形虫类（Ostracode）作为地球上最古老的的生物之一（Schnetal.,2016），一直延续至今，在水体、陆地上均有分布（禹娜，2005），过去主要应用于地质学研究中，在生物学领域的研究甚少，但作为一类新兴的实验动物，正逐渐受到人们的关注（Niyommaneeratetal.,2017）。图1.5中华薄壳介1.3抗原和抗体的制备1.3.1抗原的制备为获得能够特异性识别某个物种的几丁质酶抗体，需要先根据目标物种提取出抗原蛋白，根据现有的研究，有三种获得抗原的方法可供选择。（1）直接从目标生物体内提取出酶，经过纯化后将电泳纯的酶作为抗原。此方法优势在于获取酶源容易，但缺点是分离纯化的过程繁琐，对酶的纯度要求很高，且每次制备抗体时都需要重新提取酶，工作量大；（2）根据目标酶已知的基因序列通过序列比对后挑选特异性序列合成多肽作为抗原。多肽蛋白序列较短，生产效率高，能通过NCBI中公开的物种基因序列和蛋白序列，筛选出特异性较高的序列，减少相
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