苦豆子SaENO2基因的克隆及功能分析
发布时间：2021-12-31 13:24
植物在生长发育过程中会受到各种各样的环境胁迫,盐碱胁迫就是制约植物生长发育的胁迫之一。由于土壤盐碱胁迫不断加重,使得耕地面积日益减少,农作物的产量和质量也进一步受到影响。苦豆子（Sophora alopecuroides）是多年生豆科槐属植物,具有耐旱性、耐盐性显著的特点,在干旱和半干旱地区广泛分布,是一个抗性基因丰富的基因资源库。本研究利用摩尔比为1:1的Na2CO3和NaHCO3模拟碱胁迫筛选苦豆子cDNA酵母表达文库,得到了烯醇化酶基因SaENO2。通过基因重新转入酵母BY4743和拟南芥中过表达SaENO2,验证了SaENO2基因的功能。本试验将有助于发掘和鉴定苦豆子的抗逆基因,丰富对植物烯醇化酶生物学功能的认识,有助于深化植物生长发育和逆境响应的分子机制的认识,具有重要的科研创新价值。本研究主要获得以下结果:1.利用0.0026 mol/L摩尔比为1:1的Na2CO3和NaHCO3对苦豆子cDNA酵母表达文库进行筛选,共得到了9个抗碱单克隆,对这...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
烯醇化酶在糖酵解过程中的催化作用
培养基上继续培养酵母(见图 2.1)，进一步确定筛选浓度。结果发现:在含有0.0026 mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 的培养基上，酵母生长状况较适宜。因次，最终确定以0.0026 mol/L作为筛选抗碱酵母转化子的筛选浓度，并利用0.0026mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 对苦豆子 c DNA 酵母表达文库进行筛选。A
第2章苦豆子cDNA酵母表达文库耐碱性筛选15图2.2抗碱酵母筛选Fig.2.2Screeingofalkaliresistance2.4讨论从耐旱性、耐盐碱性显著的苦豆子中克隆基因，是获得抗性基因资源的有效方法。随着cDNA文库构建技术的不断发展，其在基因克垄功能验证等方面的研究逐渐发挥优势。研究人员以大花蕙兰为材料，成功构建了以梭梭中花香为主要成分之一的酵母单杂和双杂交cDNA文库，研究了茉莉酸甲酯（MeJA）信号通路中相关蛋白的分子机制和功能[87]。董道英等[88]成功构建了条斑紫菜酵母双杂交cDNA文库，从文库中筛选得到26个与PyMAPK5互作的候选蛋白，以进一步研究条斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白，理解其生物学功能。酵母常作为模式生物被研究，其转录组测序和蛋白质组测序已完成，具有良好的研究基矗作为真核生物，酵母细胞与植物有更为相近的转录后修饰功能，与植物表达系统相比，具有培养较为简单，后期筛选周期短、效率高等优点，因而在进行抗性基因筛选方面具备更大优势，具有可靠性和快捷性。2.5小结试验通过对酵母文库耐碱浓度的梯度试验，最终确定以0.0026mol/L的1:1Na2CO3和NaHCO3作为筛选抗碱酵母转化子的筛选条件。通过对苦豆子cDNA酵母表达文库筛选，共得到了9个单克隆，将9个单克隆进行菌株PCR检测，将测序后的序列去除载体序列，再经序列对比分析，最终选定了1个苦豆子抗碱相关基因，命名为苦豆子烯醇化酶基因（SaENO2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦豆子赖氨酸脱羧酶基因启动子在拟南芥中的表达分析[J]. 陆姗姗,洪园淑,刘萍. 草业学报. 2019(11)
[2]条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选[J]. 董道英,孔凡娜,崔正彩,孙斌. 海洋与湖沼. 2019(06)
[3]ENO1在食管鳞癌中的差异表达及对食管鳞癌细胞增殖凋亡的影响[J]. 王文洁,彭昊,李锋,杨兰,崔晓宾,陈云昭. 石河子大学学报(自然科学版). 2019(05)
[4]苦豆子资源现状、化学成分、毒性及其开发利用研究进展[J]. 史芳芸,邱明宁,李国中,张庚,吴晨晨,路浩,赵宝玉. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[5]植物烯醇化酶基因ENO2的功能研究进展[J]. 马小凤,刘子金,郑超星,王星,武宇,李洪杰,张根发. 植物遗传资源学报. 2018(06)
[6]植物对非生物胁迫的响应机制研究[J]. 刘燕敏,周海燕,王康,闫洪朗,徐建平,吴俊平,魏小云,何林池. 安徽农业科学. 2018(16)
[7]水稻OsENO2-2基因过表达对水稻抽穗期的影响[J]. 刘小云,李晓,李腾飞,苏鲁方. 中国水稻科学. 2018(01)
[8]苦豆子及其生物制品在农业上的综合应用[J]. 高亮,伏国,伏民. 现代农业科技. 2017(24)
[9]植物对盐碱胁迫的响应机制研究进展[J]. 王佺珍,刘倩,高娅妮,柳旭. 生态学报. 2017(16)
[10]苦豆子种子萌发期及幼苗期对盐、旱耐受性的探索[J]. 王彦芹,张宁,李志军. 分子植物育种. 2017(03)
博士论文
[1]苦豆子植物资源化学研究[D]. 王汉卿.南京中医药大学 2014
[2]不结球白菜抗寒相关基因的克隆及序列分析[D]. 蒋芳玲.南京农业大学 2006
[3]白念珠菌烯醇化酶的研究[D]. 唐宁枫.中国协和医科大学 2000
硕士论文
[1]感抗柳枝稷根部响应碱胁迫生理生化及转录组学研究[D]. 多田琦.东北农业大学 2019
[2]苦豆子半胱氨酸蛋白酶SaCP1基因的克隆及功能验证[D]. 赵亚男.吉林大学 2019
[3]盐胁迫下野大豆（Glycine soja）和栽培大豆（Glycine max）幼苗叶片代谢组学比较研究[D]. 张婧.东北师范大学 2017
[4]苦豆子抗盐相关基因的筛选及功能分析[D]. 郭文云.吉林大学 2016
[5]澳大利亚引进植物沙漠豆抗旱性与耐盐性研究[D]. 琴达木尼.内蒙古师范大学 2013
[6]白念珠菌烯醇化酶及其N端肽段的原核表达和应用研究[D]. 王仕钦.南京师范大学 2011
本文编号：3560336
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
烯醇化酶在糖酵解过程中的催化作用
培养基上继续培养酵母(见图 2.1)，进一步确定筛选浓度。结果发现:在含有0.0026 mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 的培养基上，酵母生长状况较适宜。因次，最终确定以0.0026 mol/L作为筛选抗碱酵母转化子的筛选浓度，并利用0.0026mol/L 的 1:1 的 Na2CO3 和 NaHCO3 对苦豆子 c DNA 酵母表达文库进行筛选。A
第2章苦豆子cDNA酵母表达文库耐碱性筛选15图2.2抗碱酵母筛选Fig.2.2Screeingofalkaliresistance2.4讨论从耐旱性、耐盐碱性显著的苦豆子中克隆基因，是获得抗性基因资源的有效方法。随着cDNA文库构建技术的不断发展，其在基因克垄功能验证等方面的研究逐渐发挥优势。研究人员以大花蕙兰为材料，成功构建了以梭梭中花香为主要成分之一的酵母单杂和双杂交cDNA文库，研究了茉莉酸甲酯（MeJA）信号通路中相关蛋白的分子机制和功能[87]。董道英等[88]成功构建了条斑紫菜酵母双杂交cDNA文库，从文库中筛选得到26个与PyMAPK5互作的候选蛋白，以进一步研究条斑紫菜促分裂原活化激酶家族PyMAPK5的下游互作蛋白，理解其生物学功能。酵母常作为模式生物被研究，其转录组测序和蛋白质组测序已完成，具有良好的研究基矗作为真核生物，酵母细胞与植物有更为相近的转录后修饰功能，与植物表达系统相比，具有培养较为简单，后期筛选周期短、效率高等优点，因而在进行抗性基因筛选方面具备更大优势，具有可靠性和快捷性。2.5小结试验通过对酵母文库耐碱浓度的梯度试验，最终确定以0.0026mol/L的1:1Na2CO3和NaHCO3作为筛选抗碱酵母转化子的筛选条件。通过对苦豆子cDNA酵母表达文库筛选，共得到了9个单克隆，将9个单克隆进行菌株PCR检测，将测序后的序列去除载体序列，再经序列对比分析，最终选定了1个苦豆子抗碱相关基因，命名为苦豆子烯醇化酶基因（SaENO2）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦豆子赖氨酸脱羧酶基因启动子在拟南芥中的表达分析[J]. 陆姗姗,洪园淑,刘萍. 草业学报. 2019(11)
[2]条斑紫菜酵母双杂交文库的构建及PyMAPK5互作蛋白的筛选[J]. 董道英,孔凡娜,崔正彩,孙斌. 海洋与湖沼. 2019(06)
[3]ENO1在食管鳞癌中的差异表达及对食管鳞癌细胞增殖凋亡的影响[J]. 王文洁,彭昊,李锋,杨兰,崔晓宾,陈云昭. 石河子大学学报(自然科学版). 2019(05)
[4]苦豆子资源现状、化学成分、毒性及其开发利用研究进展[J]. 史芳芸,邱明宁,李国中,张庚,吴晨晨,路浩,赵宝玉. 黑龙江畜牧兽医. 2019(13)
[5]植物烯醇化酶基因ENO2的功能研究进展[J]. 马小凤,刘子金,郑超星,王星,武宇,李洪杰,张根发. 植物遗传资源学报. 2018(06)
[6]植物对非生物胁迫的响应机制研究[J]. 刘燕敏,周海燕,王康,闫洪朗,徐建平,吴俊平,魏小云,何林池. 安徽农业科学. 2018(16)
[7]水稻OsENO2-2基因过表达对水稻抽穗期的影响[J]. 刘小云,李晓,李腾飞,苏鲁方. 中国水稻科学. 2018(01)
[8]苦豆子及其生物制品在农业上的综合应用[J]. 高亮,伏国,伏民. 现代农业科技. 2017(24)
[9]植物对盐碱胁迫的响应机制研究进展[J]. 王佺珍,刘倩,高娅妮,柳旭. 生态学报. 2017(16)
[10]苦豆子种子萌发期及幼苗期对盐、旱耐受性的探索[J]. 王彦芹,张宁,李志军. 分子植物育种. 2017(03)
博士论文
[1]苦豆子植物资源化学研究[D]. 王汉卿.南京中医药大学 2014
[2]不结球白菜抗寒相关基因的克隆及序列分析[D]. 蒋芳玲.南京农业大学 2006
[3]白念珠菌烯醇化酶的研究[D]. 唐宁枫.中国协和医科大学 2000
硕士论文
[1]感抗柳枝稷根部响应碱胁迫生理生化及转录组学研究[D]. 多田琦.东北农业大学 2019
[2]苦豆子半胱氨酸蛋白酶SaCP1基因的克隆及功能验证[D]. 赵亚男.吉林大学 2019
[3]盐胁迫下野大豆（Glycine soja）和栽培大豆（Glycine max）幼苗叶片代谢组学比较研究[D]. 张婧.东北师范大学 2017
[4]苦豆子抗盐相关基因的筛选及功能分析[D]. 郭文云.吉林大学 2016
[5]澳大利亚引进植物沙漠豆抗旱性与耐盐性研究[D]. 琴达木尼.内蒙古师范大学 2013
[6]白念珠菌烯醇化酶及其N端肽段的原核表达和应用研究[D]. 王仕钦.南京师范大学 2011
本文编号：3560336
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3560336.html
