两个新型硫酸皮肤素裂解酶的鉴定和应用
发布时间：2022-01-01 02:10
硫酸软骨素/硫酸皮肤素（Chondroitin Sulfate/Dermatan Sulfate,CS/DS）是一类直链线性聚阴离子多糖,由重复二糖单位组成。CS二糖单位的结构为由β-1,3糖苷键连接的葡萄糖醛酸（GlcUA）和N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）,二糖单位之间由β-1,4糖苷键连接而成CS的基本糖链骨架;当CS二糖单位中的GlcUA在C-5差向异构酶的作用下变为艾杜糖醛酸（IdoUA）时,形成了 DS二糖单位。其中,GlcUA或IdoUA的C-2、C-3位和GalNAc的C-4、C-6位在硫酸基转移酶的作用下会发生不同程度的硫酸化而形成不同硫酸化模式的二糖单位,从而产生结构高度复杂的CS/DS糖链结构。CS/DS是一类重要的糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）,作为蛋白聚糖（Proteoglycans,PGs）的侧链而存在。CS/DS链的结构高度复杂性赋予了其不同的生物活性,如参与细胞生长,细胞粘附,病毒的侵染,神经系统的发育等等。序列的不均一性,二糖排列的多变,糖醛酸的异构化尤其是硫酸化模式的不同使得CS/DS的结构与功能的研究面临巨大的挑战。CD/D...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２部分ＧＡＧｓ裂解酶的降解模式［２３］??１．３．１?ＣＳａｓｅＡＢＣ??
山东大硕被第一次鉴定［３６］，是一种外切型裂解酶，可以将ＣＳ糖链中的ＧａｌＮＡｃ和ＧＩｃＡ??之间的（３－１，４糖苷键断裂，产生一系列的寡糖，主要为不饱和二糖结构，如图１－??３所示。ＣＳａｓｅ?ＡＣＩＩ也对透明质酸有降解活性，可以降解ＨＡ中的ＧｌｃＮＡｃ和??ＧｌｃＡ之间的ｐ－ｌ，４糖苷键，但是它却不可以降解ＤＳ。ＣＳａｓｅＡＣｌＩ表现出一种外??切酶的作用模式，它可以从多糖链的非还原端一次切下一个二糖单位。ＣＳａｓｅＡＣ??Ｉ发现于肝素黄杆菌？／ｒ／〇ｆｖｏＡｏｃｔｏ＂／ＭＷ?Ａｅｐａｒ／ｗｗｗ，是一种内切酶，可以随机切割ＨＡ??和ＣＳ糖链中己糖胺ＧｌｃＮＡｃ和ＧａｌＮＡｃ与己糖醛酸ＧｌｃＡ之间的ｐ－１，４糖苷键，??但同样不能降解ＤＳ糖链中ＧａｌＮＡｃ和ＩｄｏＵＡ之间的Ｐ－１，４糖苷键１３７，３８】。??
山东大学硕士学位论文??■＂…＝：“．｜??—５Ｓ??图２－３?ＤＬａｓｅ?１?（左）和ＤＬａｓｅ?２?（右）的表达和纯化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图??泳道１：标准蛋白Ｍａｒｋｅｒ，?ＳＭ０４３１?（Ｔｈｅｒｍｏ），其每条条带代表的分子量己在旁边标出；泳??道２：未经诱导的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液；泳道３：诱导过的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液；泳道４：诱??导过的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液上清；泳道５：纯化后的ＤＬａｓｅ?１蛋白；泳道６：标准蛋白Ｍａｒｋｅｒ，??ＳＭ０４３１?（Ｔｈｅｒｍｏ）；泳道７：未经诱导的ＤＬａｓｅ２细胞裂解液；泳道８：诱导过的ＤＬａｓｅ２细??胞裂解液；泳道９：诱导过的ＤＬａｓｅ?２细胞裂解液上清；泳道１０：纯化后的ＤＬａｓｅ?２蛋白。??２．４本章小结??本章利用生物信息学分析，从基因数据库中发现了两个疑似ＤＳ专一性裂解??酶基因说似ｅｉ?（ＧｅｎＢａｎｋ？编号：ＷＰ?０１３６３４８１６．１?）和也观?２?（ＧｅｎＢａｎｋ？编??号：ＳＣＨ丨３５３０．１），这两个候选基因与已鉴定的５的相似度分别为５７％和??４３％。对两个疑似基因及其编码蛋白序列的分析表明：说似ｅ?７基因全长为１４７３??ｂｐ，?ＧＣ含量为４９．０８％，编码的蛋白包含４９１个氨基酸，理论分子量为５５．３５?ｋＤａ，??ｐｉ为８．６０，其Ｎ端信号肽包含２１个氨基酸；基因全长为１４０１ｂｐ，ＧＣ含??量为４８．６１％，编码的蛋白含有４６７个氨基酸，理论分子量为５２．００?ｋＤａ，?ｐｉ为??６．１８，其Ｎ端信号肽包含１９个氨基酸。进一步，通过全基因合成，基因重组和??蛋白质亲和纯化等技术，对这两个潜在的新型ＤＳ专一性降解酶ＤＬａｓ
【参考文献】：
博士论文
[1]一种硫酸软骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鉴定与应用[D]. 彭春娥.山东大学 2018
硕士论文
[1]美洲大赤鱿来源新型硫酸软骨素的制备及抗肿瘤转移活性研究[D]. 王庆彬.山东大学 2016
[2]鹅鱼皮胶原蛋白与硫酸皮肤素的同时提取及其结构、活性研究[D]. 杨阳.浙江工商大学 2015
本文编号：3561444
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２部分ＧＡＧｓ裂解酶的降解模式［２３］??１．３．１?ＣＳａｓｅＡＢＣ??
山东大硕被第一次鉴定［３６］，是一种外切型裂解酶，可以将ＣＳ糖链中的ＧａｌＮＡｃ和ＧＩｃＡ??之间的（３－１，４糖苷键断裂，产生一系列的寡糖，主要为不饱和二糖结构，如图１－??３所示。ＣＳａｓｅ?ＡＣＩＩ也对透明质酸有降解活性，可以降解ＨＡ中的ＧｌｃＮＡｃ和??ＧｌｃＡ之间的ｐ－ｌ，４糖苷键，但是它却不可以降解ＤＳ。ＣＳａｓｅＡＣｌＩ表现出一种外??切酶的作用模式，它可以从多糖链的非还原端一次切下一个二糖单位。ＣＳａｓｅＡＣ??Ｉ发现于肝素黄杆菌？／ｒ／〇ｆｖｏＡｏｃｔｏ＂／ＭＷ?Ａｅｐａｒ／ｗｗｗ，是一种内切酶，可以随机切割ＨＡ??和ＣＳ糖链中己糖胺ＧｌｃＮＡｃ和ＧａｌＮＡｃ与己糖醛酸ＧｌｃＡ之间的ｐ－１，４糖苷键，??但同样不能降解ＤＳ糖链中ＧａｌＮＡｃ和ＩｄｏＵＡ之间的Ｐ－１，４糖苷键１３７，３８】。??
山东大学硕士学位论文??■＂…＝：“．｜??—５Ｓ??图２－３?ＤＬａｓｅ?１?（左）和ＤＬａｓｅ?２?（右）的表达和纯化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图??泳道１：标准蛋白Ｍａｒｋｅｒ，?ＳＭ０４３１?（Ｔｈｅｒｍｏ），其每条条带代表的分子量己在旁边标出；泳??道２：未经诱导的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液；泳道３：诱导过的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液；泳道４：诱??导过的ＤＬａｓｅ?１细胞裂解液上清；泳道５：纯化后的ＤＬａｓｅ?１蛋白；泳道６：标准蛋白Ｍａｒｋｅｒ，??ＳＭ０４３１?（Ｔｈｅｒｍｏ）；泳道７：未经诱导的ＤＬａｓｅ２细胞裂解液；泳道８：诱导过的ＤＬａｓｅ２细??胞裂解液；泳道９：诱导过的ＤＬａｓｅ?２细胞裂解液上清；泳道１０：纯化后的ＤＬａｓｅ?２蛋白。??２．４本章小结??本章利用生物信息学分析，从基因数据库中发现了两个疑似ＤＳ专一性裂解??酶基因说似ｅｉ?（ＧｅｎＢａｎｋ？编号：ＷＰ?０１３６３４８１６．１?）和也观?２?（ＧｅｎＢａｎｋ？编??号：ＳＣＨ丨３５３０．１），这两个候选基因与已鉴定的５的相似度分别为５７％和??４３％。对两个疑似基因及其编码蛋白序列的分析表明：说似ｅ?７基因全长为１４７３??ｂｐ，?ＧＣ含量为４９．０８％，编码的蛋白包含４９１个氨基酸，理论分子量为５５．３５?ｋＤａ，??ｐｉ为８．６０，其Ｎ端信号肽包含２１个氨基酸；基因全长为１４０１ｂｐ，ＧＣ含??量为４８．６１％，编码的蛋白含有４６７个氨基酸，理论分子量为５２．００?ｋＤａ，?ｐｉ为??６．１８，其Ｎ端信号肽包含１９个氨基酸。进一步，通过全基因合成，基因重组和??蛋白质亲和纯化等技术，对这两个潜在的新型ＤＳ专一性降解酶ＤＬａｓ
【参考文献】：
博士论文
[1]一种硫酸软骨素E降解抗性的糖胺聚糖裂解酶的鉴定与应用[D]. 彭春娥.山东大学 2018
硕士论文
[1]美洲大赤鱿来源新型硫酸软骨素的制备及抗肿瘤转移活性研究[D]. 王庆彬.山东大学 2016
[2]鹅鱼皮胶原蛋白与硫酸皮肤素的同时提取及其结构、活性研究[D]. 杨阳.浙江工商大学 2015
本文编号：3561444
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3561444.html
