秦岭鳞翅目昆虫内生真菌分离鉴定及活性代谢产物研究
发布时间：2022-01-19 10:24
昆虫种类繁多、数量庞大,分布范围极为广泛,其体内蕴含着丰富多样的微生物资源。针对昆虫内生真菌进行系统分离、保藏和研究,不仅可以丰富微生物资源,也可以为开发结构新颖、类型丰富的微生物活性代谢产物奠定基础。本研究以秦岭鳞翅目昆虫为研究对象,建立了鳞翅目昆虫内生真菌高效分离、鉴定体系;在此基础上,对采集自秦岭四个不同生境的鳞翅目昆虫内生真菌进行了分离、鉴定及统计分析,建立秦岭鳞翅目昆虫内生真菌资源。最后,针对分离的内生真菌,进行活性代谢产物的研究,对高活性菌株次级代谢产物进行系统分离,并对获得的单体化合物进行初步分析,为发现结构新颖的抗菌活性化合物奠定基础。主要研究结果如下:1.鳞翅目昆虫内生真菌高效分离鉴定体系的建立。通过三种不同方式对鳞翅目昆虫预处理后进行内生真菌分离,确立最适预处理方式为组织剪切法;通过五种分离培养基对鳞翅目昆虫内生真菌进行分离,确立最适分离培养基为孟加拉红培养基;采取机械破壁联合微波法获取内生真菌DNA模板进行ITS序列扩增,并采取单因素法进行条件优化,最终确立机械破壁联合微波法鉴定内生真菌的方法为:挑取少半环菌丝体,装于100μL 10×Buffer TE的2 mL...
【文章来源】：陕西理工大学陕西省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鳞翅目昆虫体表消毒结果
陕西理工大学硕士学位论文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i种内生真菌的菌株数占全部内生真菌菌株数的百分比，S指不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的种类数，N为不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的总数。相似性系数（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比较两种不同生境间鳞翅目昆虫内生真菌种类组成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是两种生境中共同具有的内生真菌种类数；a是其中一个生境中的内生真菌种类数；b是另一个生境中的内生真菌种类数。3.3结果与分析3.3.1试验材料体表消毒结果检验漂洗液检验法组织印迹法图3-1鳞翅目昆虫体表消毒结果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鳞翅目昆虫体表消毒结果如图3-1所示，漂洗液检验法和组织印迹法的培养基正反面都无杂菌生长，表明昆虫样本表面消毒彻底。3.3.2秦岭鳞翅目昆虫内生真菌的分离纯化结果本研究采取组织剪切法、孟加拉红培养基对西安鄠邑区、宝鸡凤县、汉中留坝县、商洛柞水县四个不同生境采集的鳞翅目昆虫样本进行多次分离，共得到237株内生真菌，其中从西安鄠邑区的样本中共分离得到73株，从宝鸡凤县的样本中共分离得到66株，从汉中留坝的样本中共分离得到51株，从商洛柞水县的样本中共分离得到47株。部分内生真菌分离平板、菌落形态特征分别如图3-2、3-3所示。图3-2秦岭鳞翅目昆虫部分内生真菌分离平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains
陕西理工大学硕士学位论文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i种内生真菌的菌株数占全部内生真菌菌株数的百分比，S指不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的种类数，N为不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的总数。相似性系数（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比较两种不同生境间鳞翅目昆虫内生真菌种类组成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是两种生境中共同具有的内生真菌种类数；a是其中一个生境中的内生真菌种类数；b是另一个生境中的内生真菌种类数。3.3结果与分析3.3.1试验材料体表消毒结果检验漂洗液检验法组织印迹法图3-1鳞翅目昆虫体表消毒结果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鳞翅目昆虫体表消毒结果如图3-1所示，漂洗液检验法和组织印迹法的培养基正反面都无杂菌生长，表明昆虫样本表面消毒彻底。3.3.2秦岭鳞翅目昆虫内生真菌的分离纯化结果本研究采取组织剪切法、孟加拉红培养基对西安鄠邑区、宝鸡凤县、汉中留坝县、商洛柞水县四个不同生境采集的鳞翅目昆虫样本进行多次分离，共得到237株内生真菌，其中从西安鄠邑区的样本中共分离得到73株，从宝鸡凤县的样本中共分离得到66株，从汉中留坝的样本中共分离得到51株，从商洛柞水县的样本中共分离得到47株。部分内生真菌分离平板、菌落形态特征分别如图3-2、3-3所示。图3-2秦岭鳞翅目昆虫部分内生真菌分离平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains
【参考文献】：
期刊论文
[1]重庆地区玉米黏虫僵虫体内虫生真菌的分离鉴定[J]. 耿敬可,吴燕燕,顾偌铖,唐运林,韦俊宏,潘国庆,周泽扬. 西南大学学报(自然科学版). 2020(01)
[2]鳞翅目昆虫基因编辑技术研究进展[J]. 程英,靳明辉,萧玉涛. 生物技术通报. 2020(03)
[3]一株虫生真菌的分离鉴定及生防潜力研究[J]. 杨帆,刘春来,王爽,刘亮,蒋希峰,李新民. 黑龙江农业科学. 2019(12)
[4]一株具有杀虫活性链霉菌的研究[J]. 李立梅,左彤彤,邹建军,勾天兵,刘庆珍,陈越渠. 植物保护. 2019(06)
[5]中国释小卷蛾属Hermenias研究及一新记录种记述（鳞翅目:卷蛾科）（英文）[J]. 张爱环. Entomotaxonomia. 2019(03)
[6]重庆地区草地贪夜蛾幼虫肠道真菌的分离鉴定[J]. 吴燕燕,耿敬可,徐思,唐运林,顾偌铖,韦俊宏,潘国庆,周泽扬. 西南大学学报(自然科学版). 2019(09)
[7]思茅松毛虫肠道真菌分离鉴定及水解酶活性初步研究[J]. 张珊,熊忠平,张俊,聂中良,陈晓溪,凌溪,熊智. 环境昆虫学报. 2019(02)
[8]基于高通量测序的褐飞虱肠道微生物多样性分析[J]. 王天召,王正亮,朱杭锋,王紫晔,俞晓平. 昆虫学报. 2019(03)
[9]美洲大蠊可培养真菌多样性[J]. 马涛,赵敏,王成业,冯颖. 应用与环境生物学报. 2019(05)
[10]我国虫生真菌的研究现状[J]. 余垚颖,郭应菊,杨雪,王明富. 四川农业科技. 2018(12)
博士论文
[1]四株昆虫相关真菌的次级代谢产物研究[D]. 朱帅鸣.军事科学院 2019
[2]鳞翅目昆虫蔗糖特异性水解酶与非消化型α-葡萄糖苷酶的适应性进化机制研究[D]. 李晓童.浙江大学 2018
[3]鳞翅目三种不同科的昆虫线粒体基因组学分析[D]. 戴立上.安徽农业大学 2016
[4]四种农业生境昆虫内生放线菌的筛选、鉴定及抗菌活性研究[D]. 房保柱.东北农业大学 2015
[5]小菜蛾中肠微生物多样性及其功能研究[D]. 夏晓峰.福建农林大学 2014
[6]盐渍化极端生态环境条件下土壤微生物生态及放线菌资源[D]. 来航线.西北农林科技大学 2008
硕士论文
[1]大蜡螟附生微生物多样性研究[D]. 何欢.贵州大学 2019
[2]核桃高活性内生真菌筛选及其代谢产物抑菌活性的研究[D]. 刘泽星.西北农林科技大学 2017
[3]应用DNA复合条形码技术研究蝗虫肠道微生物多样性[D]. 杨丽平.陕西师范大学 2017
[4]日本弓背蚁共生放线菌的多样性分析及抑菌活性研究[D]. 郭丽枫.东北农业大学 2016
[5]中华蜂内共生放线菌的分离、多样性及抗菌活性研究[D]. 刘娟.四川农业大学 2015
[6]拟黑多刺蚁共生放线菌的筛选、鉴定及抗菌活性研究[D]. 于超.东北农业大学 2014
[7]两株昆虫病原内生菌次级代谢产物研究[D]. 方启.上海交通大学 2014
[8]秦岭“七药”植物资源及其地理分布格局研究[D]. 王梅.西北农林科技大学 2014
[9]小菜蛾不同发育阶段肠道细菌多样性分析[D]. 郑丹丹.福建农林大学 2013
[10]天津八仙山鳞翅目幼虫多样性初步研究[D]. 刘淑蓉.南开大学 2011
本文编号：3596686
【文章来源】：陕西理工大学陕西省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鳞翅目昆虫体表消毒结果
陕西理工大学硕士学位论文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i种内生真菌的菌株数占全部内生真菌菌株数的百分比，S指不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的种类数，N为不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的总数。相似性系数（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比较两种不同生境间鳞翅目昆虫内生真菌种类组成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是两种生境中共同具有的内生真菌种类数；a是其中一个生境中的内生真菌种类数；b是另一个生境中的内生真菌种类数。3.3结果与分析3.3.1试验材料体表消毒结果检验漂洗液检验法组织印迹法图3-1鳞翅目昆虫体表消毒结果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鳞翅目昆虫体表消毒结果如图3-1所示，漂洗液检验法和组织印迹法的培养基正反面都无杂菌生长，表明昆虫样本表面消毒彻底。3.3.2秦岭鳞翅目昆虫内生真菌的分离纯化结果本研究采取组织剪切法、孟加拉红培养基对西安鄠邑区、宝鸡凤县、汉中留坝县、商洛柞水县四个不同生境采集的鳞翅目昆虫样本进行多次分离，共得到237株内生真菌，其中从西安鄠邑区的样本中共分离得到73株，从宝鸡凤县的样本中共分离得到66株，从汉中留坝的样本中共分离得到51株，从商洛柞水县的样本中共分离得到47株。部分内生真菌分离平板、菌落形态特征分别如图3-2、3-3所示。图3-2秦岭鳞翅目昆虫部分内生真菌分离平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains
陕西理工大学硕士学位论文32其中Pi=Ni/N，Pi是指第i种内生真菌的菌株数占全部内生真菌菌株数的百分比，S指不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的种类数，N为不同生境鳞翅目昆虫内生真菌的总数。相似性系数（Sorensonsimilaritycoefficient，Cs）用于分析比较两种不同生境间鳞翅目昆虫内生真菌种类组成的相似程度[139]。Cs=2j/（a+b），其中j是两种生境中共同具有的内生真菌种类数；a是其中一个生境中的内生真菌种类数；b是另一个生境中的内生真菌种类数。3.3结果与分析3.3.1试验材料体表消毒结果检验漂洗液检验法组织印迹法图3-1鳞翅目昆虫体表消毒结果Fig.3-1ResultsofsurfacedisinfectionofLepidoptera鳞翅目昆虫体表消毒结果如图3-1所示，漂洗液检验法和组织印迹法的培养基正反面都无杂菌生长，表明昆虫样本表面消毒彻底。3.3.2秦岭鳞翅目昆虫内生真菌的分离纯化结果本研究采取组织剪切法、孟加拉红培养基对西安鄠邑区、宝鸡凤县、汉中留坝县、商洛柞水县四个不同生境采集的鳞翅目昆虫样本进行多次分离，共得到237株内生真菌，其中从西安鄠邑区的样本中共分离得到73株，从宝鸡凤县的样本中共分离得到66株，从汉中留坝的样本中共分离得到51株，从商洛柞水县的样本中共分离得到47株。部分内生真菌分离平板、菌落形态特征分别如图3-2、3-3所示。图3-2秦岭鳞翅目昆虫部分内生真菌分离平板Fig.3-2PlateisolationofsomeendophyticfungusinLepidopteraofqinlingmountains
【参考文献】：
期刊论文
[1]重庆地区玉米黏虫僵虫体内虫生真菌的分离鉴定[J]. 耿敬可,吴燕燕,顾偌铖,唐运林,韦俊宏,潘国庆,周泽扬. 西南大学学报(自然科学版). 2020(01)
[2]鳞翅目昆虫基因编辑技术研究进展[J]. 程英,靳明辉,萧玉涛. 生物技术通报. 2020(03)
[3]一株虫生真菌的分离鉴定及生防潜力研究[J]. 杨帆,刘春来,王爽,刘亮,蒋希峰,李新民. 黑龙江农业科学. 2019(12)
[4]一株具有杀虫活性链霉菌的研究[J]. 李立梅,左彤彤,邹建军,勾天兵,刘庆珍,陈越渠. 植物保护. 2019(06)
[5]中国释小卷蛾属Hermenias研究及一新记录种记述（鳞翅目:卷蛾科）（英文）[J]. 张爱环. Entomotaxonomia. 2019(03)
[6]重庆地区草地贪夜蛾幼虫肠道真菌的分离鉴定[J]. 吴燕燕,耿敬可,徐思,唐运林,顾偌铖,韦俊宏,潘国庆,周泽扬. 西南大学学报(自然科学版). 2019(09)
[7]思茅松毛虫肠道真菌分离鉴定及水解酶活性初步研究[J]. 张珊,熊忠平,张俊,聂中良,陈晓溪,凌溪,熊智. 环境昆虫学报. 2019(02)
[8]基于高通量测序的褐飞虱肠道微生物多样性分析[J]. 王天召,王正亮,朱杭锋,王紫晔,俞晓平. 昆虫学报. 2019(03)
[9]美洲大蠊可培养真菌多样性[J]. 马涛,赵敏,王成业,冯颖. 应用与环境生物学报. 2019(05)
[10]我国虫生真菌的研究现状[J]. 余垚颖,郭应菊,杨雪,王明富. 四川农业科技. 2018(12)
博士论文
[1]四株昆虫相关真菌的次级代谢产物研究[D]. 朱帅鸣.军事科学院 2019
[2]鳞翅目昆虫蔗糖特异性水解酶与非消化型α-葡萄糖苷酶的适应性进化机制研究[D]. 李晓童.浙江大学 2018
[3]鳞翅目三种不同科的昆虫线粒体基因组学分析[D]. 戴立上.安徽农业大学 2016
[4]四种农业生境昆虫内生放线菌的筛选、鉴定及抗菌活性研究[D]. 房保柱.东北农业大学 2015
[5]小菜蛾中肠微生物多样性及其功能研究[D]. 夏晓峰.福建农林大学 2014
[6]盐渍化极端生态环境条件下土壤微生物生态及放线菌资源[D]. 来航线.西北农林科技大学 2008
硕士论文
[1]大蜡螟附生微生物多样性研究[D]. 何欢.贵州大学 2019
[2]核桃高活性内生真菌筛选及其代谢产物抑菌活性的研究[D]. 刘泽星.西北农林科技大学 2017
[3]应用DNA复合条形码技术研究蝗虫肠道微生物多样性[D]. 杨丽平.陕西师范大学 2017
[4]日本弓背蚁共生放线菌的多样性分析及抑菌活性研究[D]. 郭丽枫.东北农业大学 2016
[5]中华蜂内共生放线菌的分离、多样性及抗菌活性研究[D]. 刘娟.四川农业大学 2015
[6]拟黑多刺蚁共生放线菌的筛选、鉴定及抗菌活性研究[D]. 于超.东北农业大学 2014
[7]两株昆虫病原内生菌次级代谢产物研究[D]. 方启.上海交通大学 2014
[8]秦岭“七药”植物资源及其地理分布格局研究[D]. 王梅.西北农林科技大学 2014
[9]小菜蛾不同发育阶段肠道细菌多样性分析[D]. 郑丹丹.福建农林大学 2013
[10]天津八仙山鳞翅目幼虫多样性初步研究[D]. 刘淑蓉.南开大学 2011
本文编号：3596686
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