一次性生物反应器和过滤澄清系统在重组抗体生产中的应用

发布时间：2022-12-24 09:57

　　随着基因工程和细胞工程的发展,利用高密度动物细胞生产的重组抗体药物展示出良好的治疗效果和市场效益,市场需求日益增加。由于动物细胞的培养周期长,无菌要求高以及药物研发的周期要求越来越短等因素影响,促使了一次性产品的快速发展。本文针对动物细胞抗体生产上游培养与收获环节,对一次性生物反应器和一次性单级澄清过滤系统进行测试与评估。通过对两种一次性生物反应器（一次性搅拌罐式生物反应器和WAVE波浪式生物反应器）与传统生物反应器的对比结果显示,一次性搅拌罐式生物反应器与传统生物反应器由于结构及工作原理相似,生产中无论从细胞生长状态、代谢产物分析、抗体表达水平及最终产品质量都可以较容易的达到很好的一致性。而WAVE波浪式生物反应器与其他两种搅拌式生物反应器工作原理上有所不同,所以抗体表达量和细胞生长相对差一些。在细胞培养初期,三种生物反应器各种检测结果可以达到一致;但到了中后期,WAVE波浪式生物反应器,由于代谢副产物浓度过高,抑制了细胞的生长,从而影响了产量,但最终产品的质量未受影响,在此次比较测试中未能达到预期的结果,今后在培养条件控制上仍需要进一步优化。在对一次性单级过滤澄清系统的优化中,使用... 

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究的目的和意义
    1.2 研究背景
        1.2.1 重组抗体生产的研究背景
            1.2.1.1 重组抗体的简介
            1.2.1.2 重组抗体的生产途径
        1.2.2 一次性生物反应器的研究背景
            1.2.2.1 一次性生物反应器的种类和选择
            1.2.2.2 一次性生物反应器的应用范围
            1.2.2.3 一次性生物反应器的优点
        1.2.3 澄清过滤系统的研究背景
            1.2.3.1 过滤的含义
            1.2.3.2 过滤的机理
            1.2.3.3 影响过滤的因素
            1.2.3.4 制药使用的过滤器分类与特性
            1.2.3.5 过滤器的选择原则
            1.2.3.6 过滤系统的常规配置
            1.2.3.7 抗体生产中的细胞培养液澄清工艺
    1.3 研究思路及内容
        1.3.1 研究思路
        1.3.2 研究内容
第2章 一次性生物反应器在重组抗体生产中的应用
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验耗材
        2.1.4 实验仪器
    2.2 实验过程与方法
        2.2.1 实验过程
            2.2.1.1 培养基的制备
            2.2.1.2 种子的制备
            2.2.1.3 接种前各生物反应器的准备工作
            2.2.1.4 细胞培养
            2.2.1.5 细胞收获
            2.2.1.6 抗体的纯化
        2.2.2 样品处理及分析方法
            2.2.2.1 细胞计数方法
            2.2.2.2 细胞培养液中营养物质及代谢产物的测定方法
            2.2.2.3 SDS-PAGE蛋白电泳方法
            2.2.2.4 等电聚焦电泳（IEF）方法
            2.2.2.5 Affinity-HPLC检测方法
            2.2.2.6 SEC-HPLC检测方法
            2.2.2.7 LC-MS检测方法
            2.2.2.8 Fortebio检测方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 不同反应器中细胞生长的比较
        2.3.2 营养物质和代谢产物的检测和比较
        2.3.3 抗体表达水平的测定
        2.3.4 抗体质量的分析比较
            2.3.4.1 SDS-Page电泳分析
            2.3.4.2 LC-MS检测
            2.3.4.3 等电聚焦电泳分析
            2.3.4.4 多聚体检测
            2.3.4.5 结合活性检测
    2.4 结果分析与讨论
第3章 一次性澄清过滤系统在重组抗体生产中的应用
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 实验耗材
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法与过程
        3.2.1 实验分组及样品预处理
        3.2.2 实验过程
    3.3 实验结果
        3.3.1 新滤器过滤结果
            3.3.1.1 料液特性及工艺需求
            3.3.1.2 料液未预处理过滤结果
            3.3.1.3 料液预处理过滤结果
        3.3.2 新滤器与现有配置滤器对比结果
            3.3.2.1 澄清过滤效果与配置对比结果
            3.3.2.2 抗体收率的对比结果
            3.3.2.3 最终产物质量对比结果
    3.4 结果分析与讨论
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]一次性生物反应器的研究进展[J]. 王远山,朱旭,牛坤,徐建妙.  发酵科技通讯. 2015(03)
[2]重组单克隆抗体生物类似药质量研究的一般考虑[J]. 韦薇,罗建辉,白玉.  中国药学杂志. 2014(18)
[3]国外一次性使用技术与一次性生物反应器在生物技术领域的应用现状[J]. 焦鹏.  生物产业技术. 2013(02)
[4]生物反应器及其研究技术进展[J]. 王永红,夏建业,唐寅,杭海峰,易小萍,潘江,许建和,张嗣良.  生物加工过程. 2013(02)
[5]重组抗体高效表达的研究进展（Ⅰ）[J]. 胡迪超,张爱华,杨晓明.  中国生物制品学杂志. 2013(01)
[6]人源单克隆抗体药物质量控制与分析[J]. 聂静苑,刘煜.  中国生化药物杂志. 2012(02)
[7]动物细胞培养反应器的主要操作模式[J]. 朱庆虎,陈弘,秦红丽,刘兰刚,康二勇.  畜牧兽医科技信息. 2010(10)
[8]表达TNFR-Fc融合蛋白的GS-CHO细胞动态流加培养过程的设计[J]. 范里,赵亮,孙亚婷,寇天赐,谭文松.  生物工程学报. 2010(02)
[9]WAVE生物反应器在生物制品生产中的应用[J]. 佟芳,王辉.  中国生物制品学杂志. 2009(12)
[10]制药使用的过滤器特性与选择原则探讨[J]. 秦保振.  机电信息. 2009(23)

博士论文
[1]GS-CHO细胞无血清培养过程的开发与优化[D]. 范里.华东理工大学 2010



本文编号：3725986