拟南芥尿苷酸转移酶URT1结构与功能研究

发布时间：2023-01-25 22:44

　　目前已知一百多种转录后修饰会影响真核生物RNA命运,并进一步影响转录产物功能、定位、稳定性等等,与人类多种疾病息息相关。现在知道广泛存在修饰的RNA包括rRNAs、tRNAs、snRNA、miRNA等各种非编码RNA和mRNA等。另外,古细菌、细菌和真核生物一样,也普遍存在mRNA修饰。真核生物中,编码RNA和非编码RNA的3’末端不依赖模板添加核苷酸是一种重要的转录后修饰,根据添加核苷酸种类的不同分为腺苷酸化,尿苷酸化,胞苷酸化和鸟苷酸化四种。最常见的腺苷酸化的主要功能是导致RNA降解和起始翻译,而胞苷酸化和鸟苷酸化至今研究较少,对尿苷酸化的研究近几年则取得突破性进展。RNA 3’端无模板地添加尿苷酸,我们称为尿苷酸化修饰,有助于调节基因表达,例如触发RNA降解,促进RNA加工或保持RNA稳定性。帮助完成尿苷酸化修饰的酶称为末端尿苷酸转移酶（TUTases）,属于DNA聚合酶β超家族,通常由DNA聚合酶β核苷酸转移酶结构域（NTD）和poly（A）聚合酶相关结构域（PAP）共同构成。NTD位于蛋白质N端,包含三个保守的天冬氨酸（Asp）或谷氨酸（Glu）螯合二价金属离子以完成催化,因... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
引言
第1章 URT1背景介绍
    1.1 RNA
        1.1.1 mRNA
        1.1.2 短链非编码mRNA
    1.2 尿苷酸化(Uridylation)修饰
        1.2.1 诱导RNA降解
        1.2.2 维持RNA稳定性
        1.2.3 在免疫防御中的作用
    1.3 尿苷酸转移酶(Uridylyltransferases)
        1.3.1 粟酒裂殖酵母中的TUTases--Cid1
        1.3.2 人源中的TUTases--TUT1、TUT4和TUT7
        1.3.3 果蝇中的TUTases--Tailor
        1.3.4 拟南芥的TUTases--URT1和HES01
第2章 材料与方法
    2.1 蛋白质URT1边界的选择及克隆方法
        2.1.1 边界的选择
        2.1.2 分子克隆
    2.2 蛋白质URT1的表达纯化
    2.3 蛋白质的结晶与数据获取
        2.3.1 蛋白质晶体获取
        2.3.2 晶体数据获取
    2.4 晶体结构解析
    2.5 酶活功能——EMSA实验
第3章 URT1结构和功能
    3.1 拟南芥蛋白质URT1边界的选择
    3.2 拟南芥蛋白质URT1截短边界表达
    3.3 拟南芥蛋白质URT1与底物RNA相互作用
    3.4 拟南芥蛋白质URT1单体结构
    3.5 拟南芥蛋白质URT1与同源蛋白质结构比较
    3.6 URT1-UTP结构及相互作用分析
    3.7 URT1-AAAU结构及相互作用分析(未发表)
        3.7.1 URT1-AAAU复合物结构
        3.7.2 URT1与AAAU相互作用
    3.8 缺陷与展望
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Uridylation and adenylation of RNAs[J]. SONG JianBo,SONG Jun,MO BeiXin,CHEN XueMei.  Science China（Life Sciences）. 2015(11)



本文编号：3731877