hnRNP K基因抑制BEFV复制及其机制的初步研究

发布时间：2023-02-10 16:49

　　牛流行热(Bovine Ephemeral Fever,BEF)是由牛流行热病毒(Bovine Ephemeral Fever Virus,BEFV)感染牛引起的一种急性、热性传染病。该病可导致产奶量下降和死亡率上升,给我国养牛业造成重大经济损失。尽管已经生产了许多预防BEFV感染的商业疫苗,但目前的预防和控制策略不能对感染BEFV的牛提供可持续的保护。近年来,宿主因子与病毒的相互作用机制越来越受到人们的关注。因此深入研究BEFV复制的分子机制,开展病毒与宿主因子互作的研究将有助于我们更好地了解病毒感染的机制。BEFV基因组共编码5个结构蛋白(N、P、M、G、L)和6个非结构蛋白(G_NS、α1、α2、α3、β、γ)。研究表明,病毒蛋白在病毒复制中发挥至关重要的作用,但目前BEFV非结构蛋白的功能在很大程度上是未知的。因此,通过对BEFV非结构蛋白的功能进行研究,为深入探讨BEFV复制的分子机制奠定基础。hnRNP K为hnRNPs家族成员,可以与RNA、DNA、蛋白质结合,参与RNA剪切加工、转录、翻译调控、细胞增殖、细胞凋亡等生物学过程。目前研究表明,hnRNP...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 综述
    1 BEFV研究进展
        1.1 BEF简介
        1.2 BEF流行病学
        1.3 BEFV病原学
        1.4 BEFV诊断与防控
    2 hnRNP K研究进展
        2.1 hnRNP K概述
        2.2 hnRNP K基因结构
        2.3 hnRNP K的生物学功能
        2.4 hnRNP K与病毒的关系
    3 研究目的及意义
第二章 hnRNP K通过抑制α3 的表达抑制BEFV复制
    1 实验材料
        1.1 实验毒株和细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 细胞与病毒培养
        2.2 hnRNP K慢病毒表达载体构建
        2.3 稳定细胞系的建立
        2.4 TCID50 测定
        2.5 免疫共沉淀
        2.6 蛋白质印迹
    3 实验结果
        3.1 hnRNP K抑制BEFV在 BHK-21 细胞中的复制
        3.2 hnRNP K与病毒蛋白α3 互作
        3.3 hnRNP K抑制病毒蛋白α3 的表达
    4 讨论
第三章 hnRNP K通过抑制BEFV诱导的细胞凋亡抑制病毒复制
    1 实验材料
        1.1 实验毒株和细胞系
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 α3 诱导细胞凋亡
        2.2 细胞凋亡对BEFV复制的影响
        2.3 hnRNP K对 BEFV诱导的细胞凋亡的影响
    3 实验结果
        3.1 BEFV非结构蛋白α3 诱导细胞凋亡
        3.2 BEFV感染诱导的细胞凋亡促进病毒复制
        3.3 hnRNP K抑制BEFV诱导的细胞凋亡
    4 讨论
第四章 caspase3 活性介导hnRNP K的降解
    1 实验材料
        1.1 实验毒株和细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 试剂配制
        1.4 主要仪器及设备
    2 实验方法
        2.1 细胞样品的制备
        2.2 细胞总RNA提取
        2.3 合成c DNA
        2.4 荧光定量PCR
        2.5 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 BEFV感染下调hnRNP K蛋白水平表达
        3.2 BEFV下调hnRNPK蛋白水平表达不通过蛋白酶体和自噬溶酶体途径
        3.3 hnRNP K的降解由caspase3 活性介导
    4 讨论
第五章 结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3739543