基于生信分析筛选胃癌关键基因及miR-30a-3p靶向MAD2L1调控胃癌细胞增殖的研究
发布时间：2023-04-04 01:20
胃癌是全世界范围内常见的消化系统肿瘤之一,其死亡率一直居高不下。由于复杂的发病机制,且恶性病变程度对病人的身体健康造成了严重威胁,目前临床尚无针对其的早期特异性诊断和有效治疗方法。因此,开发新的早期诊断和治疗方法是目前的研究重点。在肿瘤研究中,应用生物信息学数据库,筛选与肿瘤发生发展相关的基因,可为临床对疾病诊断和新药开发提供新的科学依据。微小RNA(microRNA)作为一种小的非编码RNA参与肿瘤的发生发展,在许多进程中发挥重要作用,包括参与调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、分化等等。随着近年来对miRNA的深入研究,越来越多的研究结果表明,肿瘤中部分miRNA表达失调,可以通过扮演原癌基因或者抑癌基因的角色进一步参与调控肿瘤的发生发展。有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2L1)是有丝分裂检查点复合蛋白的重要组成部分,MAD2L1基因在人中位于4号染色体,在小鼠中位于6号染色体上。本研究利用生物信息学数据库分析发现,与正常组织相比,MAD2L1在胃癌组织中显著高表达;MAD2L1与miR-30a-3p表达显著负相关;miR-30a-3p可以和MAD2L1的3’-UTR区结合,推测MAD2...
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
1.绪论
1.1 生物信息学在肿瘤研究中的应用
1.2 胃癌研究现状
1.3 miRNA概述
1.4 胃癌与miRNA
1.5 miR-30a-3p研究进展
1.6 MAD2L1研究进展
2.实验材料与试剂
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂
2.3 主要试剂的制备
2.3.1 Western blot试剂的制备
2.3.2 分子克隆培养基的制备
2.3.3 细胞实验相关试剂的制备
3.生物信息学预测分析胃癌关键基因和miR-30a-3p
3.1 实验方法
3.1.1 GEO数据库分析差异表达基因
3.1.2 TCGA数据库分析差异表达基因
3.1.3 GEO与 TCGA所得差异表达基因取交集
3.1.4 PPI分析差异表达基因
3.1.5 TCGA数据库结合Target Scan分析差异表达基因和筛选miR-30a-3p
3.2 实验结果
3.2.1 GEO数据库分析差异表达基因
3.2.2 TCGA数据库分析差异表达基因
3.2.3 GEO与 TCGA所得差异表达基因取交集
3.2.4 PPI分析96个差异表达基因的关系网络图
3.2.5 生物信息学分析MAD2L1
3.2.6 生物信息学分析和筛选miR-30a-3p
3.2.7 生物信息学预测分析miR-30a-3p和 MAD2L1 的靶向关系
3.3 讨论
4.miR-30a-3p在胃癌细胞中的生物学功能
4.1 实验方法
4.1.1 准备工作
4.1.2 细胞培养
4.1.3 转染实验
4.1.4 细胞RNA的提取
4.1.5 RNA逆转录及qRT-PCR实验
4.1.6 MTT实验
4.1.7 克隆形成实验
4.1.8 细胞周期实验
4.1.9 统计学分析
4.2 实验结果
4.2.1 转染效率验证
4.2.2 miR-30a-3p对胃癌细胞增殖能力的影响
4.2.3 miR-30a-3p对胃癌细胞周期的影响
4.3 讨论
5.miR-30a-3p靶向MAD2L1
5.1 实验方法
5.1.1 准备工作
5.1.2 HEK-293细胞基本信息
5.1.3 双荧光素酶报告基因实验
5.1.4 细胞蛋白的提取及蛋白定量
5.1.5 Western blot实验
5.1.6 统计学分析
5.2 实验结果
5.2.1 双荧光素酶报告基因实验验证
5.2.2 miR-30a-3p对MAD2L1蛋白水平的影响
5.3 讨论
6.同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞增殖的影响
6.1 实验方法
6.1.1 MTT实验
6.1.2 细胞周期实验
6.1.3 统计学分析
6.2 实验结果
6.2.1 同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞增殖能力的影响
6.2.2 同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞周期的影响
6.3 讨论
7.结论与展望
7.1 结论
7.2 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的研究成果
本文编号：3781512
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
1.绪论
1.1 生物信息学在肿瘤研究中的应用
1.2 胃癌研究现状
1.3 miRNA概述
1.4 胃癌与miRNA
1.5 miR-30a-3p研究进展
1.6 MAD2L1研究进展
2.实验材料与试剂
2.1 实验仪器
2.2 实验试剂
2.3 主要试剂的制备
2.3.1 Western blot试剂的制备
2.3.2 分子克隆培养基的制备
2.3.3 细胞实验相关试剂的制备
3.生物信息学预测分析胃癌关键基因和miR-30a-3p
3.1 实验方法
3.1.1 GEO数据库分析差异表达基因
3.1.2 TCGA数据库分析差异表达基因
3.1.3 GEO与 TCGA所得差异表达基因取交集
3.1.4 PPI分析差异表达基因
3.1.5 TCGA数据库结合Target Scan分析差异表达基因和筛选miR-30a-3p
3.2 实验结果
3.2.1 GEO数据库分析差异表达基因
3.2.2 TCGA数据库分析差异表达基因
3.2.3 GEO与 TCGA所得差异表达基因取交集
3.2.4 PPI分析96个差异表达基因的关系网络图
3.2.5 生物信息学分析MAD2L1
3.2.6 生物信息学分析和筛选miR-30a-3p
3.2.7 生物信息学预测分析miR-30a-3p和 MAD2L1 的靶向关系
3.3 讨论
4.miR-30a-3p在胃癌细胞中的生物学功能
4.1 实验方法
4.1.1 准备工作
4.1.2 细胞培养
4.1.3 转染实验
4.1.4 细胞RNA的提取
4.1.5 RNA逆转录及qRT-PCR实验
4.1.6 MTT实验
4.1.7 克隆形成实验
4.1.8 细胞周期实验
4.1.9 统计学分析
4.2 实验结果
4.2.1 转染效率验证
4.2.2 miR-30a-3p对胃癌细胞增殖能力的影响
4.2.3 miR-30a-3p对胃癌细胞周期的影响
4.3 讨论
5.miR-30a-3p靶向MAD2L1
5.1 实验方法
5.1.1 准备工作
5.1.2 HEK-293细胞基本信息
5.1.3 双荧光素酶报告基因实验
5.1.4 细胞蛋白的提取及蛋白定量
5.1.5 Western blot实验
5.1.6 统计学分析
5.2 实验结果
5.2.1 双荧光素酶报告基因实验验证
5.2.2 miR-30a-3p对MAD2L1蛋白水平的影响
5.3 讨论
6.同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞增殖的影响
6.1 实验方法
6.1.1 MTT实验
6.1.2 细胞周期实验
6.1.3 统计学分析
6.2 实验结果
6.2.1 同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞增殖能力的影响
6.2.2 同时过表达miR-30a-3p和 MAD2L1 对胃癌细胞周期的影响
6.3 讨论
7.结论与展望
7.1 结论
7.2 展望
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的研究成果
本文编号：3781512
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3781512.html
