慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪初步研究

发布时间：2023-11-17 18:17

　　目的:通过EGFP慢病毒感染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)进行标记,经局部皮下注射移植入同种异体正常大鼠体内,利用荧光显微镜及免疫组化检测移植细胞在大鼠体内的分布、迁移和定居情况,评价EGFP慢病毒对大鼠脂肪干细胞的标记及示踪效果。方法:提取培养大鼠脂肪干细胞,HE染色查看细胞形态,成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。CCK8法绘制脂肪干细胞生长曲线。慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因以不同的感染复数(Multiplicity of infection,MOI)转染ADSCs(MOI=0、1、5、10、25、50),流式细胞仪测转染率。CCK8法检测标记后脂肪干细胞(EGFP—ADSCs)的增殖能力。标记后的脂肪干细胞成骨诱导14天、成脂诱导21天、成软骨诱导14天后分别进行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到同种异体大鼠皮下,术后7天,14天,28天取移植部位及主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑)行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP—ADSCs在体内的表达情况。结果:提取大鼠脂肪干细胞24h后见少量贴壁细胞,形态多不规则。传代后细胞形态呈长梭形,分布方向规律...

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
英文缩略语对照表
第1章 引言
第2章 慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞
    2.1 引言
    2.2 实验试剂与仪器
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 SD大鼠脂肪干细胞的提取
        2.3.2 脂肪干细胞的培养
            2.3.2.1 脂肪干细胞纯化与传代
            2.3.2.2 脂肪干细胞的冻存
            2.3.2.3 脂肪干细胞的复苏
        2.3.3 脂肪干细胞形态学检测
        2.3.4 绘制脂肪干细胞生长曲线
        2.3.5 脂肪干细胞成骨、成脂、成软骨诱导及检测
        2.3.6 携带EGFP基因的慢病毒转染大鼠脂肪干细胞
        2.3.7 流式细胞仪分析阳性转染率
        2.3.8 标记后的大鼠脂肪干细胞(EGFP—ADSCs)增殖能力检测
        2.3.9 标记后的大鼠脂肪干细胞成骨、成脂、成软骨诱导及检测
    2.4 结果与分析
        2.4.1 细胞形态学观察
        2.4.2 脂肪干细胞生长曲线
        2.4.3 脂肪干细胞成骨、成脂、成软骨诱导
        2.4.4 转染率分析
        2.4.5 EGFP—ADSCs增殖能力检测
        2.4.6 EGFP—ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导
    2.5 讨论
第3章 EGFP—ADSCs注入到同种异体正常大鼠体内
    3.1 引言
    3.2 实验试剂与仪器
        3.2.1 实验试剂及耗材
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 实验动物的选择和分组
        3.3.2 EGFP—ADSCs注入到大鼠体内
        3.3.3 荧光显微镜观察及HE染色
        3.3.4 EGFP免疫组织化学检测
    3.4 结果与分析
        3.4.1 HE染色及EGFP荧光显微镜下观察结果
        3.4.2 EGFP免疫组织化学染色结果
    3.5 讨论
第4章 结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢



本文编号：3864640