柯萨奇病毒A6型疫苗候选株筛选及细胞嗜性相关位点的研究

发布时间：2023-11-18 11:16

　　CV-A6(Coxsackievirus A6)能引起手足口病,并在近年来成为流行性手足口病的主要病原体,逐渐成为全球公共健康的威胁。CV-A6能感染人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD)使其出现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并能够在其中增殖。但其极难以在人用疫苗细胞基质(如Vero细胞)上增殖。获得CV-A6的人用疫苗细胞基质适应株是目前工作的难点和重点所在。本课题旨在获得CV-A6于Vero细胞上的适应株,同时研究与CV-A6 Vero细胞嗜性和生长能力相关的位点。本课题基于实验室在前期研究中于襄阳2000余份样本中获得的8株CV-A6RD细胞适应株。通过在RD细胞上连续传代,最终于RD第16代获得了一株可在Vero细胞上生长的CV-A6适应株CV-A6-HEV3391/XY/2017株(下简称3391)。对3391-R16V6(RD细胞传至16代,Vero细胞传至6代)进行连续三轮的空斑纯化。通过对生长特性、抗原含量、病毒滴度等方面的比较,选取克隆株P49-21-21为骨架,合成cDNA,构建全长cDNA质粒,进行病毒拯救,获得了无RD细胞背景的CV-A6疫...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
技术路线
第一章 :材料及实验方法
    1.实验材料
    2.实验试剂及仪器
    3.实验试剂配置
    4.实验方法
第二章 :CV-A6疫苗株的筛选及拯救
    1.实验结果
    2.小结
第三章 :CV-A6细胞嗜性相关位点研究
    1.实验结果
        1.1.细胞传代过程中细胞嗜性研究
        1.2.获取细胞嗜性差异株
        1.3.c712/和c1023克隆株拯救
        1.4.氨基酸差异位点的点突变
    2.小结
第四章 :CV-A6生长能力的研究
    1.实验结果
        1.1.res712与res3391 生长能力的比较
        1.2.res712与res3391 株的同源重组
        1.3.重组株生长特性的比较
    2.小结
第五章：总结与讨论
    1.总结与讨论
    2.下一步工作计划
参考文献
附录
致谢



本文编号：3865177