小球藻病毒启动子在莱茵衣藻中的转录活性分析

发布时间：2024-03-14 01:09

　　小球藻病毒来源的启动子具有在原核生物与真核生物都能启动基因转录的特点,本实验利用来自小球藻病毒且在大肠杆菌中具有强调控活性的启动子序列来构建莱茵衣藻转化载体。将博莱霉素抗性基因sh ble与绿色荧光蛋白基因gfp融合成的ble-gfp筛选标记-报告基因融合基因置于小球藻病毒启动子控制下,同时构建无启动子和由内源rbcS2启动子控制的正负对照转化载体。上述转化载体经电击导入胞壁缺陷型莱茵衣藻藻株Chlamydomonas reinhardtii cc503后分别用7.5μg/mL和4μg/mL博莱霉素进行平板和液体筛选,得到一系列sh ble抗性藻落;而无启动子的对照转化载体没得到任何抗性藻落。经PCR扩增发现小球藻病毒来源的N63、N80、N99、N35启动子控制下的ble-gfp融合基因插入了sh ble抗性藻细胞基因组。用qRT-PCR方法检测了病毒启动子和rbcS2启动子控制的sh ble转录文本丰度,结果表明小球藻病毒启动子和rbcS2启动子一样在莱茵衣藻中具有正常的启动活性。将上述筛选到的启动活性较强的启动子来构建含有gpd1基因的重组质粒,同样用电击转化法转化进莱茵衣藻细胞...

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【部分图文】：

图1-1莱茵衣藻显微结构图

第1章绪论5的新工艺是从微藻中生产高产优质燃料油的一种可行而有效的方法。1.2莱茵衣藻1.2.1简介近年来莱茵衣藻已经被证明是研究光合作用、叶绿体生物发生、鞭毛生物合成、细胞识别和细胞周期调控等重要生物学问题的理想的系统[31]。莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhar....

图1-2莱茵衣藻油脂代谢途径Fig1-2lipidmetabolismpathwayofChlamydomonasreinhardtii

河北大学硕士学位论文6脂和磷脂等为细胞膜的重要组成成分[34]。如三酰甘油(triacylglycerol,TAG)是储存脂质存在的主要形式，是制造生物柴油的理想原材料。随着不断的研究，关于莱茵衣藻脂质代谢的关键基因被鉴定出来，这将对莱茵衣藻油脂代谢过程的研究具有重要的意义[35....

图1-3衣藻转化株PCR验证结果

河北大学硕士学位论文10茵衣藻中。本实验室应用在大肠杆菌中构建了小球藻病毒启动子文库，发现筛选的启动子在酵母、大肠杆菌、莱茵衣藻中均具有启动活性，并对小球藻病毒启动子N63在莱茵衣藻中的转录活性进行分析。提取莱茵衣藻转化株的基因组，进行PCR验证，结果如图1-3所示，发现在N63....

图1-4莱茵衣藻CC503pBR11-N63转化子共聚焦图像

第1章绪论11图1-4莱茵衣藻CC503pBR11-N63转化子共聚焦图像A，可见光下的图像；B和C，分别是GFP和叶绿体发射的荧光图像；D，A、B和C图像重叠的图像。Fig1-4:confocalimageofChlamydomonasreinhardtiiCC503pBR11....

本文编号：3927834