rhPGRN通过MAPK/PI3K通路调控自噬和内质网应激促进细胞增殖的实验研究

发布时间：2024-04-27 19:28

　　目的探讨人源重组蛋白颗粒蛋白前体rhPGRN(recombinant human progranulin,rhPGRN)对软骨细胞C28I2和巨噬细胞RAW264.7增殖、自噬和内质网应激的影响及作用机制。方法采用Ni-NTA琼脂糖树脂对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,通过考马斯亮蓝染色、BCA法和Western blot验证目的蛋白的纯度和浓度。将细胞随机分为对照、rhPGRN、U0126、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、rhPGRN+U0126、rhPGRN+3-MA、rhPGRN+bafilomycin A1(Baf-A1)、rhPGRN+4-苯基丁酸钠(4-phenyl butyric acid,4-PBA)组,采用细胞计数法、Western blot和RT-PCR检测rhPGRN对C28I2和RAW264.7两种不同类型细胞增殖、自噬和内质网应激(ER stress)的影响。结果(1)在含有His标签PGRN的稳转细胞株中成功提取高纯度、具有生物活性的人源重组蛋白rhPGRN。(2)rhPGRN能促进C28I2和RAW264.7细胞的增殖,促进细...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1GRN的基因图谱

重庆医科大学硕士研究生学位论文11图1.1GRN的基因图谱Figure1.1GenemapofGRN.A:GenomiclocationofGRN.2.2GRN基因结构与序列人类GRN基因包含两种不同的转录本（图1.2A）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），mRNA....

图1.2GRN的结构与序列

重庆医科大学硕士研究生学位论文12图1.2GRN的结构与序列Figure1.2StructureandsequenceofGRN.A:structureofGRN,transcriptvariantX1andtranscriptvariantX2.B:Nucleicacidseq....

图1.3不同物种间GRN基因结构比较

重庆医科大学硕士研究生学位论文13马鱼（D.rerio）中全长26950bp，含25个外显子，24个内含子。通过比较上述不同物种间的基因序列，发现GRN基因尤其是外显子序列在不同物种中是高度保守的（图1.3）（引自www.ncbi.nlm.nih.gov），最新研究表明不同种属间....

图1.4PGRN的蛋白质结构图谱和蛋白相互作用网络

重庆医科大学硕士研究生学位论文14颗粒中，Granulin-3被证实可抑制上皮细胞增殖并诱导上皮细胞分泌IL-8[8]；Granulin-4可以促进培养中上皮细胞系A431的增殖[7]；Granulin-7通过与组织蛋白酶D（CathepsinD,CTSD）相互作用来稳定CTSD....

本文编号：3965613