MK2通过β-TrCP泛素连接酶促进Tfcp2l1降解来调控小鼠胚胎干细胞自我更新的研究

发布时间：2024-06-30 14:12

　　胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)由于其特性,即在分化为其他不同类型细胞的同时还能保持自己不断更新的状态而成为科学家们重点关注的对象。目前关于胚胎干细胞的研究中最多的是小鼠胚胎干细胞(mouse ESCs,mESCs),我们先前研究表明CP2家族转录因子Tfcp2l1(Transcription factor CP2-like protein 1)是mESCs维持自我更新的一个重要基因。Tfcp2l1是自我更新相关信号通路LIF/STAT3、Wnt/β-catenin以及FGF/MEK/ERK的共同靶点。Tfcp2l1转录本的上调能够代替细胞因子LIF或Wnt/β-catenin信号激动剂和FGF/MEK/ERK通路的抑制剂(CHIR99021和PD0325901,即2I)介导的自我更新促进作用。更重要的是,与LIF/STAT3信号通路的其他靶基因相比,只有下调Tfcp2l1才有可能削弱LIF介导的自我更新作用。此外,Tfcp2l1能够将小鼠外胚层干细胞(mouse Epiblast Stem Cells,mEpiSCs)重编程回到mESCs状态。因此,T...

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【部分图文】：

图3.1.3鉴定β-TrCP2对Tfcp2l1的调节作用

第三章实验结果32图3.1.2.敲低β-TrCP1验证其对Tfcp2l1蛋白的调控作用(A)β-TrCP1shRNA慢病毒和β-TrCP1shRNA慢病毒感染mESCs，在LIF/血清培条件下检测β-TrCP1和Tfcp2l1的表达水平。数据给出了三个生物重复的平均值±S。**p....

图3.2.1.β-TrCP1与野生型Tfcp2l1的蛋白结合能力较强

第三章实验结果34(Tfcp2l1-Mut)。为了弄清楚Tfcp2l1上的DSGDNS残基是否是β-TrCP1结合的位点。我们同样的进行了免疫共沉淀实验，首先，我们将Flag标记的野生型和构建成功的突变型Tfcp2l1分别转导到HA标记的β-TrCP1的46C小鼠胚胎干细胞中，用....

图3.2.2.野生型Tfcp2l1的泛素化强于突变型Tfcp2l1

第三章实验结果36图3.2.2.野生型Tfcp2l1的泛素化强于突变型Tfcp2l1（A）免疫印迹分析mESCs中在CHX作用下分别过表达Flag-Tfcp2l1和Flag-Tfcp2l1Mut细胞株中Tfcp2l1蛋白的表达，GAPDH作为上样量一致的对照。（B）将上述4个不同....

图3.3.1.MK2负调控Tfcp211蛋白的表达

安徽大学硕士学位论文37考数据库，发现同样的S393和S397是MK2识别和磷酸化的两个预测磷酸化位点，其共识磷酸化位点是SXXXS[最终的S可以是T]。为了了解Tfcp2l1的稳定性是否受MK2控制，我们进行了三个实验。首先，我们在mESCs中强制过表达HA标记的MK2，空载作....

本文编号：3998854