转录辅助因子Yki招募Mediator复合体调控下游靶基因表达

发布时间：2025-03-19 00:10

　　Hippo信号通路参与多种生物学过程,如胚胎发育、器官大小调控、成体干细胞维持、天然免疫调节、肿瘤发生发展。该通路已经成为生命科学研究的热点方向。Hippo通路最早于2003年在果蝇中通过EMS介导的突变体筛选被发现,后续的研究发现,该通路再进化中高度保守。Hippo通路的失调会导致多种人类疾病,甚至肿瘤发生。探究Hippo通路活性调控机制,对于理解发育、肿瘤发生,都具有重要意义。果蝇中,Hippo通路通过一系列激酶偶联反应将信号传递给辅助转录因子Yki,调控Yki蛋白的磷酸化和亚细胞定位。当Hippo通路处于活化状态,激酶Hpo和Sav形成具有活性的复合体,磷酸化下游激酶Wts,Wts被激活。激酶Wts和Mats形成复合体,磷酸化下游的转录辅助因子Yki。磷酸化的Yki在细胞质中于微管相关蛋白14-3-3结合,滞留在细胞质,无法进入细胞核发挥转录活性。当Hippo通路失活,Yki的磷酸化被解除,非磷酸化的Yki蛋白进入细胞核,和转录因子Sd结合,共同激活下游靶基因表达。我们最新的研究也显示,Hippo通路不仅调控Yki的磷酸化和亚细胞定位,也调控Yki蛋白的稳定性。Hippo通路抑制Y...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 果蝇作为模式生物的基本概况
        1.1.1 果蝇发育过程简介
        1.1.2 果蝇作为模式生物的优点
        1.1.3 GAL4/UAS系统简述
        1.1.4 FLP/FRT技术简述
        1.1.5 果蝇翅原基模型
    1.2 Hippo信号通路的研究进展
        1.2.1 Hippo信号通路的发现
        1.2.2 Hippo信号通路简述
        1.2.3 Hippo信号通路的模式简述
    1.3 Kto研究进展
        1.3.1 Kto简介
        1.3.2 Kto与肿瘤发生
    1.4 研究目的与意义
    1.5 研究思路
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 果蝇品系和培养条件
        2.1.2 试剂耗材及试剂盒
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 信息检索网站及相关数据处理分析软件
        2.1.5 实验所用细胞株系及培养条件
        2.1.6 PCR实验所用引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 相关试剂的配制
        2.2.2 果蝇饲养培养基的制备
        2.2.3 DNA片段扩增及载体的构建
        2.2.4 果蝇翅原基的解剖及抗体染色
        2.2.5 显微注射转基因果蝇
        2.2.6 果蝇染色体置换杂交方案
        2.2.7 细胞相关操作
        2.2.8 Western blotting实验
        2.2.9 Co-IP实验
        2.2.10 细胞染色
3 结果与分析
    3.1 Kto调控果蝇器官的大小
    3.2 Kto通过Hippo信号通路参与器官大小的调节
    3.3 Skd,CDK8和Cyc C参与调节果蝇器官大小
    3.4 Skd,CDK8和Cyc C参与调节Hippo信号通路活性
    3.5 Kto作用于Hippo信号通路的下游
    3.6 验证Kto在 Hippo信号通路的作用位点
    3.7 Kto定位于细胞核中
    3.8 Kto、Skd与 Yki存在蛋白-蛋白间互作
    3.9 Yki可能通过招募RNA聚合酶Ⅱ调控Hippo信号通路
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况



本文编号：4036387