拟南芥叶绿体PPR蛋白AtECB2参与RNA编辑的机理研究

发布时间：2017-12-20 12:30

  本文关键词：拟南芥叶绿体PPR蛋白AtECB2参与RNA编辑的机理研究　出处：《华东师范大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：高等植物细胞器中RNA编辑是转录后加工的一种,其主要是将RNA上特定位点的胞嘧啶C转换成尿哺啶U。RNA编辑过程需要PPR家族蛋白和MORF蛋白的共同参与。拟南芥PPR蛋白AtECB2能够影响6个叶绿体基因(accD、 ndhF、ndhG、petL、rpoA以及rpoC1)转录本的编辑,但是其中的分子机理仍然是不清楚的。本论文中,我们创建了AtECB2融合4xMYC标签的转基因互补植株。以此为材料,RNA结合蛋白免疫沉淀(Rip)实验表明AtECB2蛋白能够显著富集accD、ndhF、ndhG以及petL基因的转录本,说明AtECB2蛋白很可能结合到这些质体基因的转录本上参与RNA编辑过程。同时,我们利用特异的MYC抗体对AtECB2-4xMYC重组蛋白进行体内免疫共沉淀(Co-IP)实验。实验结果显示AtECB2蛋白与MORF蛋白中的MORF2以及叶绿素合成途径中的胆色素原脱氨酶HEMC能够共沉淀,提示这些蛋白可能参与AtECB2相关的编辑过程。酵母双杂交结果表明AtECB2蛋白的E结构域与HEMC蛋白有直接的相互作用,而HEMC又与MORF8有直接互作。已报道MORF2与MORF8蛋白能够相互作用。遗传分析表明,HEMC缺失的T-DNA敲除突变体hemc-1呈现白化致死的表型。该突变体中叶绿体基因转录本编辑效率较野生型的相比显著下降。这些结果表明AtECB2蛋白很可能通过HEMC与MORF蛋白偶联起来共同参与叶绿体转录本的RNA编辑过程。免疫印迹表明,AtECB2和MORF8主要定位在类囊体膜上。BN-PAGE结果表明,AtECB2主要存在于440-669kD左右复合物中,而MORF8蛋白存在于440kDa以上的复合物中。因此,MORF8蛋白很可能存在于AtECB2所在的复合物中。这些工作不仅揭示了AtECB2参与RNA编辑的机制,也有助于人们对于质体RNA编辑体(editosome)的深入理解。
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q943.2

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本文编号：1312111