寻找新的组蛋白赖氨酸去甲基化酶和甲基化赖氨酸识别蛋白

发布时间：2017-03-25 23:08

  本文关键词：寻找新的组蛋白赖氨酸去甲基化酶和甲基化赖氨酸识别蛋白，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：组蛋白赖氨酸甲基化修饰是“组蛋白密码”假说的重要组成部分,在生物体的生命活动中扮演着重要功能。组蛋白赖氨酸甲基化是由赖氨酸甲基转移酶催化SAM产生,由甲基化赖氨酸识别蛋白与其结合体现其功能,也能够由组蛋白去甲基化酶将其移除。目前还有多个组蛋白甲基化位点对应的去甲基化酶没有被发现,而发现新的组蛋白甲基化赖氨酸识别蛋白有助于更深入理解组蛋白甲基化的生物学功能。在本研究的第一部分中,我们尝试寻找新的组蛋白赖氨酸去甲基化酶。我们发现,在体外的GST pull-down实验中,AlkB家族蛋白质ALKBH7能够结合组蛋白,并且能够在以组蛋白为底物的去甲基化实验中减弱H4K20me2的抗体信号,但该活性相当微弱,我们的多种尝试均不能使其增强。该结果没能在以H4K20me2甲基化多肽为底物的质谱实验中得到确证。我们接着通过免疫荧光和细胞组份分离实验表明,ALKBH7定位于线粒体。免疫沉淀-质谱实验结果显示ALKBH7同JDUFS3等多个蛋白相互作用。根据最近报道的ALKBH7的晶体结构与脯氨酸羟化酶PHD2的相似性,我们设计了多条多肽,通过质谱技术寻找ALKBH7的底物,但皆未能得到阳性结果。在本研究的第二部分中,我们探索FMR1作为一个新的组蛋白甲基化赖氨酸识别蛋白的可能性。我们发现,在体外的GST pull-down实验中,FMR1 N端能够结合组蛋白,且该相互作用依赖于组蛋白的翻译后修饰。但在随后的peptide array, peptide pull-down等实验中,我们没有能够确定FMR1具体的结合位点。我们的免疫荧光和细胞组份分离实验表明,FMR1同细胞核存在紧密的联系,但ChIP-cloning实验表明FMR1不与染色质相互作用。我们同时发现,当FMRl被敲低时,蛋白P55的水平发生了显著上升,该现象可能为最近报道的FMR1敲低抑制yH2AX的生成提供了新的解释。本研究的第三部分探索了纯化的化学交联的CD3-HER2双特异性抗体在介导CIK细胞杀伤肿瘤细胞中的功能。我们发现,该双特异性抗体对CIK细胞毒性的增强于CIK的自发毒性相关,当CIK细胞自发毒性较弱时,纯化的双特异性抗体能够显著增强其细胞毒性；而当其自发毒性较强时,纯化的双特异性抗体与化学交联产生的粗品相比,不具有明显差异。该部分作为博士阶段完成的工作之一,一并附于此文中。
【关键词】：组蛋白 赖氨酸甲基化 ALKBH7 FMR1 双特异抗体
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q55;Q51
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 缩写词表7-8
• 第一部分 寻找人类AlkB双氧酶家族成员ALKBH7的底物8-38
• 一、研究背景8-16
• 二、实验结果16-36
• 三、讨论36-38
• 第二部分 探索FMR1蛋白同组蛋白的相互作用38-56
• 一、研究背景38-44
• 二、实验结果44-53
• 三、讨论53-56
• 第三部分 纯化的anti-CD3×anti-HER2双特异性抗体能够显著增强自发细胞毒性较弱的CIK细胞的杀伤能力56-65
• 一、研究背景56-57
• 二、实验结果57-63
• 三、讨论63-65
• 第四部分：材料与方法65-106
• 一、第一部分中使用的实验方法65-83
• 二、第二部分中使用的实验方法83-89
• 三、第三部分中使用的实验方法89-94
• 四、实验材料来源94-98
• 五、实验试剂配制98-106
• 综述：人类AlkB家族成员生物学功能的研究进展106-112
• 参考文献112-122
• 致谢122-123
• 博士期间发表文章123-

【参考文献】

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1 陈晓啸;;以全系列、高品质产品迎接国内售后市场黄金期——访天合汽车公司售后市场部门[J];汽车与配件;2010年20期

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本文编号：267905