人脂肪干细胞向平滑肌细胞分化的分子机制研究

发布时间：2020-12-06 19:05

　　目的:1)诱导人脂肪干细胞（human adipose derived stem cells,hASCs）向平滑肌细胞分化并鉴定;2)探讨miR-145在hASCs向平滑肌细胞分化过程中的表达及作用;3)预测miR-145的作用靶基因,并确定miR-145及其靶基因对hASCs向平滑肌细胞分化过程中的作用机制;4)阐明钙离子/钙调素依赖的蛋白激酶IIγ（Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase IIγ,Ca MKIIγ）在hASCs向平滑肌细胞分化过程中的表达与作用机制。方法:1)分离培养人脂肪干细胞并鉴定;将第三代hASCs在转化生长因子β1（TGF-β1）和骨形态蛋白4（BMP4）的作用下向平滑肌细胞诱导分化,用荧光定量PCR、western blot、免疫荧光等方法检测平滑肌细胞特异性标记物的表达;2)hASCs向平滑肌细胞诱导7天以后检测miR-145的表达情况;合成miR-145模拟物及抑制物,并将其转染到hASCs,检测转染效率。转染成功以后进行诱导,观察平滑肌细胞特异性标记物的表达,并确定miR-145在这过程中的作用;3)利用生物... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：140 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原代人脂肪干细胞,×40

新疆医科大学博士学位论文 结果.1 人脂肪干细胞的生长状况及镜下形态原代培养的脂肪干细胞在接种后的 24 小时呈现短、细的条索状，并含有少量的造血细胞，48 小时以后细胞迅速增长，第 4~5 天达到生长平台期。当细胞汇达到 80%左右时进行传代。第三代人脂肪干细胞形态均一，排列有序，成纤维体狭长。（图 1-1，图 1-2）

（图 1-1，图 1-2）图 1-1 原代人脂肪干细胞, ×40 图 1-2 第三代人脂肪干细胞, ×40Fig.1-1 hASCs at first passage, ×40 Fig.1-2 hASCs at third passage, ×40 人脂肪干细胞表面抗原的检测实验所用的第三代至第五代人脂肪干细胞进行了流式细胞术检测细胞表结果显示：CD13、CD34、CD44、CD49d、CD90、CD105 以及 CD166 阳而造血细胞与内皮细胞表达的 CD14、CD45 与 CD31 阴性表达，根据这个内皮细胞和造血系的污染。（图 1-3，表 1-2）


本文编号：2901883