VKORC1和CYP4F2基因多态性作用于维生素K1及对华法林对映异构体浓度和药效学指标影响的研究

发布时间：2017-12-07 21:20

本文关键词：VKORC1和CYP4F2基因多态性作用于维生素K1及对华法林对映异构体浓度和药效学指标影响的研究

【摘要】：目的:华法林(Warfarin,WF)是目前应用广泛的口服抗凝血药,由于WF的有效治疗范围狭窄,个体间剂量差异大,有效剂量不易控制,故临床主要以凝血酶原时间(prothrombin time,PT)和国际标准化比率(international normalized ratio,INR)作为其抗凝监测指标。WF用药剂量受很多因素的影响,包括:维生素K的摄入、种族、年龄、合并用药、体重指数以及遗传基因等方面的因素。本研究通过分析遗传基因(VKORC1和CYP4F2)和维生素K1(VitaminK1,VK1)对WF的剂量反应的作用、血浆中VK1浓度和CYP4F2基因多态性以及与VKORC1的相关性,尝试揭示体内VK1的浓度与WF敏感指数的关系,为今后WF在临床上的个体化给药提供参考,以期达到提高抗凝控制率、减少出血风险、增强临床医生使用WF治疗信心的目的。方法:血浆VK1的HPLC-MS/MS检测方法:采用APCI源正离子模式,稳定性同位素标记物(VitaminK1-d7)为内标定量,VK1和内标的检测离子对质荷比分别为m/z:451.0→187.0和458.6→194.4,乙醇沉淀蛋白,环己烷为萃取剂进行液液萃取,使用Synergl 4u Fusion-RP C18(2.1mm×100mm,2.5μm)进行色谱分离,流动相为A:B=水(0.05%甲酸):甲醇,梯度洗脱程序,流速0.3mL/min;血浆WF对映异构体的HPLC-MS/MS检测方法:采用ESI源负离子模式,萘普生为内标定量,WF和内标的检测离子对质荷比分别为m/z:307.2→160.9和228.9→185.1,1mol/L盐酸作为缓冲环境,乙酸乙酯液液萃取。通过Lux Cellulose-3手性色谱柱(2.1mm×100mm,2μm)分离WF对映异构体和内标,A:B=水(0.5%甲酸):甲醇,流速:0.2mL/min;临床样本的收集、采集以及检测:收集南京东南大学附属医院正常使用WF达到稳定剂量的房颤患者21例作为观察组,选择同期健康受试者55例作为对照组,统一给予实验标准餐。患者纳入标准:(1)患者稳定抗凝至少3个月(抗凝水平在治疗窗以内);(2)抽血前一个月有稳定的日常WF剂量。排除标准:有和胺碘酮以及抗癌药联合应用的。WF抗凝治疗方案:初始剂量1~3mg,根据INR调整剂量。观察组实验清晨空腹抽取WF给药前谷浓度外周血9.0mL,对照组空腹抽取外周血5.0mL。分别检测每位患者血浆中VK1以及WF对映异构体浓度、凝血因子水平、PT/INR、VKORC1、CYP4F2、CYP2C9基因型;检测每位健康受试者血浆中VK1和VKORC1、CYP4F2基因型。根据所测得VK1和WF对映异构体浓度,结合VKORC1和CYP4F2基因型和凝血因子水平、PT-INR,采用Origin统计学软件对基因多态性和VK1与WF对映异构体浓度和药效学指数进行相关性分析。结果:研究建立的检测血浆中VK1和WF对映异构体浓度的HPLC-MS/MS测定方法通过方法学考察,证明准确、可靠。由于样品量有限和WF个体差异大等因素,研究中虽未发现患者血浆中VK1浓度和WF敏感指数显著性相关,但在中国部分汉族人群中证明了VKORC1和CYP4F2基因多态性显著地影响血浆中VK1浓度。研究结果发现携带VKORC1G/A基因型的患者VK1浓度显著性的高于携带A/A基因型的患者(p0.05);携带CYP4F2C/T和T/T基因型的患者VK1浓度显著性的高于携带C/C基因型的患者(p0.05)。而健康受试者中,VKORC1基因多态性和VK1的浓度的相关性不显著,但CYP4F2(T/T+C/T)基因型的VK1浓度显著高于C/C基因型(p0.05)。结合文献提示临床医生在WF的治疗过程中,携带VKORC1G/G+CYP4F2T/T基因型的患者有较宽的WF治疗窗,相对安全;携带VKORC1G/A+CYP4F2C/T基因型的患者使用WF时要监测INR,不断调整WF个体用药,以达到安全用药的目的;值得注意的是携带VKORC1A/A+CYP4F2C/C基因型的患者对WF剂量特别敏感,临床中不仅要实时检测INR;还需要通过调整饮食,严格控制VK1的摄入量;必要时换用新型口服抗凝药保证患者的用药安全。结论:建立的HPLC-MS/MS测定血浆中VK1和WF对映异构体浓度的方法已成功运用到检测房颤患者的VK1和WF对映异构体浓度的临床试验中,且方法简单易行,值得临床进一步推广应用。在中国汉族人群中首次证明了VKORC1和CYP4F2基因多态性显著地影响血浆中VK1浓度。本研究结果建议在使用WF时要注意VKORC1和CYP4F2基因多态性、维生素K1水平以及INR、凝血因子水平等因素的影响,以更好更快地发挥WF的抗凝作用。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R969

【参考文献】

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