慢病毒介导的CYP17A1基因沉默对胶质瘤细胞生物学活性的影响

发布时间：2017-12-08 06:32

  本文关键词：慢病毒介导的CYP17A1基因沉默对胶质瘤细胞生物学活性的影响

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【摘要】：目的:检测不同病理级别胶质瘤组织中CYP17A1的表达,及CYP17A1和AR共表达的意义。建立CYP17A1基因沉默胶质瘤细胞株,并研究CYP17A1基因沉默对胶质瘤细胞生物学活性的影响,为进一步研究雄激素信号通路在胶质瘤发生发展中的作用奠定了基础。方法:(1)采用免疫组化、Real time-PCR、Western blot实验方法,检测55例胶质瘤组织及10例正常脑组织中CYP17A1的表达情况。(2)采用免疫组化的方法检测CYP17A1及AR在胶质瘤组织中的共表达。(3)通过慢病毒包装的CYP17A1特异性sh RNA表达载体,建立CYP17A1表达沉默的细胞株,并通过Real time-PCR实验检测该细胞株中CYP17A1的m RNA的表达情况。(4)通过Western blot、CCK-8、Transwell细胞迁移侵袭实验、流式细胞术、裸鼠成瘤实验等方法检测CYP17A1基因沉默对胶质瘤细胞生物学活性的影响。结果:(1)与正常脑组织相比,在胶质瘤组织中CYP17A1基因在蛋白质水平和m RNA水平的表达量明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在胶质瘤组织明显高表达,在正常组织中不表达或低表达,并随着病理级别升高而表达增强(P0.05)。(3)成功建立CYP17A1基因沉默细胞株,并用Real time-PCR检测T98G-CYP17A1组与空白对照组及空质粒组CYP17A1m RNA的表达,T98G-CYP17A1组的CYP17A1的m RNA表达水平明显降低(F=15.44,P0.05)。(4)与空白对照组和空质粒组相比,T98G-CYP17A1组胶质瘤细胞在增殖水平、侵袭和迁移能力均明显下降,细胞凋亡明显增加;T98G-CYP17A1异位移植瘤的裸鼠皮下成瘤能力明显弱于空白对照组及空质粒组(P0.05)。结论:(1)在胶质瘤组织中CYP17A1在蛋白质和m RNA水平的表达量明显高于正常脑组织。(2)CYP17A1蛋白和AR蛋白在胶质瘤组织中高表达提示雄激素通路参与了胶质瘤的发生发展过程。(3)成功建立了CYP17A1基因沉默细胞株,为进一步研究CYP17A1与胶质瘤生物学活性奠定了基础。(4)T98G-CYP17A1细胞的增殖、迁移和侵袭力均明显下调;且细胞凋亡显著增加。CYP17A1基因沉默能抑制胶质瘤细胞在体内外的生物学活性。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.41

【参考文献】

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本文编号：1265406