结直肠癌中miR-9-1基因启动子区甲基化检测研究

发布时间：2017-12-10 20:31

  本文关键词：结直肠癌中miR-9-1基因启动子区甲基化检测研究

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【摘要】：背景:多项研究提示,结直肠癌中miR-9表达水平较正常组织明显下降,miR-9水平升高在体外有抑制肿瘤生长的作用,其异常表达可引起肿瘤侵袭、转移。基因甲基化是miR-9表达水平的一种调控方式,已有文献报道甲基化特异PCR(MSP)技术检测到结直肠癌miR-9-1基因启动子区甲基化。对基因甲基化的检测,焦磷酸测序是金标准,但综合操作和费用等方面,不适于临床应用,MSP是目前广泛认可的甲基化检测方法,但随着高分辨溶解曲线(HRM)、荧光探针甲基化特异PCR(Methylight)等方法的出现,MSP是否还是最适的检测方法还没有相关研究。研究目的:1.分析甲基化特异PCR(MSP)、高分辨溶解曲线(HRM)、荧光探针甲基化特异PCR(Methylight)三种结直肠癌miR-9-1基因启动子区甲基化检测方法的优劣,选择出最适方法,为miR-9临床检测的应用提供参考。2.进一步研究miR-9-1甲基化调控在结直肠癌不同分期中的变化,进一步分析miR-9-1甲基化是否与肿瘤预后相关。研究方法:1.以焦磷酸测序为金标准,对比MSP、HRM、Methylight三种结直肠癌miR-9-1基因启动子区甲基化检测方法,选出最适方法及最适条件。2.采用最适方法检测79例结直肠癌标本中miR-9-1启动子区甲基化状况,根据标本对应患者分期,分析甲基化状况与结直肠癌分期关系。研究结果:1.MSP法相对于焦磷酸测序法的总检出率为70%,阳性检出率100%,阴性检出率57.14%。HRM技术在实验过程中发现其重复实验结果变化较大,考虑其不适合在复杂样本中检测基因甲基化。Methylight法相对焦磷酸法的总检出率、阳性检出率及阴性检出率均达100%。Methylight方法,即用HotStart Taq酶甲基化特异PCR扩增结合荧光探针的方法可能是一种更为临床适用的方法。2.在79例结直肠癌病例标本中,随病例分期升高,miR-9-1甲基化检出率升高(P0.05),但无统计学意义研究结论:1.甲基化特异性PCR结合荧光探针的Methylight方法为目前石蜡组织特定DNA甲基化检测最适方法,为后续研究组织DNA甲基化提供便利2.miR-9-1基因启动子区域甲基化可能与晚期结肠癌存在联系,为后续扩大样本研究miR-9-1基因启动子区域甲基化与结直肠癌肿瘤侵袭、转移的关系,与肿瘤预后的影响提供参考。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.34

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本文编号：1275838