MGF对骨骼肌卫星细胞MEK-ERK信号通路影响的研究

发布时间：2017-12-12 11:17

  本文关键词：MGF对骨骼肌卫星细胞MEK-ERK信号通路影响的研究

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【摘要】：研究目的骨骼肌损伤在运动和训练中非常容易发生,严重时可使机体丧失运动能力。有研究表明在骨骼肌的损伤修复过程中,骨骼肌卫星细胞起着重要作用。损伤后,卫星细胞通过增殖、迁移,最终融入已损伤的肌细胞或形成新的肌管和肌细胞。研究表明机械生长因子(MGF)参与了这一过程。本研究通过离体实验,观察阻断MEK-ERK信号通路后各个蛋白的变化情况,探讨MGF对骨骼肌卫星细胞信号通路的调节机制,为骨骼肌损伤修复提供理论依据。实验方法在无菌条件下,提取2周龄的雄性SD大鼠(2只,约100g)双侧的腓肠肌和比目鱼肌;两步酶消化法(Ⅱ型胶原酶和胰酶)消化充分剪碎的肌肉,释放卫星细胞;采用两次差速贴壁法(差速贴壁时间为2h)来纯化卫星细胞。使用台盼蓝染色鉴定卫星细胞活性;通过横纹肌肌动蛋白抗体来鉴定卫星细胞纯度。取第三代卫星细胞进行干预,分为对照组(细胞+生长培养液)、MGF组(细胞+MGF+生长培养液)、MGF+PD组(细胞+MGF+PD98059+生长培养液),干预一天。用BCA法测定细胞总蛋白含量;采用Western Blot检测各个分组中MEK、pMEK、p-ERK、ERK、MyoD、Myf5蛋白的表达情况。实验结果1、卫星细胞活性检测结果:实验中细胞共计数614个,着色数22个,卫星细胞活性率为(614-22)÷614×100%=96.4%。2、卫星细胞纯度检测结果:横纹肌肌动蛋白在细胞上呈棕褐色,即为阳性表达,显示该细胞为卫星细胞。卫星细胞纯度为97.7%。3、24h后,MGF组总蛋白含量显著高于对照组(p0.01),MGF+PD组总蛋白含量低于MGF组(p0.05)。4、24h后,MGF+PD组MEK蛋白表达高于对照组(p0.05)和MGF组(p0.05)。MGF组与MGF+PD组ERK蛋白表达均高于对照组(p0.01),MGF+PD组ERK蛋白表达高于MGF组(p0.01)5、24h后,MGF组p-MEK蛋白表达显著高于对照组(p0.01)。MGF组p-ERK蛋白表达亦高于对照组(p0.05)。6、24h后,MGF组Myf5和MyoD蛋白表达均高于对照组(p0.01),MGF+PD组MyoD蛋白高于对照组和MGF组(p0.01)。MGF+PD组Myf5蛋白表达显著低于MGF组(p0.01),而与对照组无差异。结论1、MGF能激活MEK-ERK信号通路,促进SC总蛋白合成。2、阻断MEK-ERK通路后,作用于SC,可下调Myf5蛋白表达,上调MyoD蛋白表达。
【学位授予单位】：上海体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R873

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本文编号：1282290