苦参素影响ARID1A在肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H中的表达

发布时间：2017-12-14 18:32

  本文关键词：苦参素影响ARID1A在肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H中的表达

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【摘要】：目的检测ARID1A基因与蛋白在人肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝细胞株L02中表达的变化,并观察苦参素(Oxymatrine,OM)对不同转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L和MHCC97H的抑制作用及其对ARID1A表达的影响,探讨苦参素抑制肝癌的可能作用机制。方法以人肝癌细胞株MHCC97L、MHCC97H和人正常肝细胞株L02细胞为研究对象。(1)利用细胞免疫荧光技术检测ARID1A在3种细胞中的表达与定位;(2)用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术分别检测ARID1A mRNA和BAF250a蛋白在3种细胞株中的表达;(3)MTT法检测OM对MHCC97L和MHCC97H细胞增殖的影响;(4)用qRT-PCR技术和Western blot技术分别检测OM干预后ARID1A mRNA和BAF250a蛋白在2株肝癌细胞中的表达。结果(1)细胞免疫荧光检测发现ARID1A在MHCC97L、MHCC97H和L02细胞有不同表达,且均定位于细胞核中;(2)q RT-PCR检测结果发现,ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中的表达均低于L02细胞(P0.05),但在MHCC97L和MHCC97H之间的相对表达量比较无差异(P0.05);(3)Western blot检测结果发现在MHCC97L和MHCC97H细胞中BAF250a蛋白的表达均低于L02细胞(P0.05),但在MHCC97L和MHCC97H之间的表达比较无差异(P0.05)。(4)MTT法观察发现不同浓度和时间OM干预MHCC97L和MHCC97H细胞后,OM浓度越高,细胞生长抑制率越高,呈剂量依赖性(P0.05),随着OM干预时间延长无明显时间依赖性(P0.05)。(5)qRT-PCR检测OM干预MHCC97L和MHCC97H细胞后发现:与阴性对照组0mg/ml组比较,在浓度为0.5mg/ml-2.0mg/ml范围时,ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中相对低表达,但在浓度为1.0mg/ml-4.0mg/ml范围时其相对表达量显示出上升趋势(P0.05)。同一浓度下ARID1A mRNA在MHCC97L和MHCC97H细胞中的表达无明显差异(P0.05)。(6)Western blot检测OM干预MHCC97L和MHCC97H后与对照组0mg/ml组比较,MHCC97L和MHCC97H细胞中BAF250a蛋白在OM浓度为0.5-4.0mg/ml范围时表达量增多(P0.05)。在0.5mg/ml和1.0mg/ml浓度下,MHCC97L细胞中BAF250a蛋白的表达高于MHCC97H细胞(P0.05)。结论(1)ARID1A在肝癌细胞系和L02中存在不同的表达,MHCC97L和MHCC97H细胞中ARID1A的表达低于人正常肝细胞株L02。(2)苦参素对MHCC97L和MHCC97H人肝癌细胞株有抑制作用,苦参素能促进MHCC97L和MHCC97H肝癌细胞系中ARID1A编码的蛋白的表达,对恶性程度较低的MHCC97L细胞作用较明显;上调ARID1A蛋白的表达可能是苦参素抑制肝癌细胞增殖的分子机制之一。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】

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本文编号：1288947