替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用及机制研究

发布时间：2017-12-14 21:24

  本文关键词：替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用及机制研究

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【摘要】：目的:探究药物替格瑞洛对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用及机制。方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,抽取一例服用替格瑞洛(180mg/d)后2h的急性冠脉综合征(ACS)病人血液标本,将其离心后取上层血清,与高糖培养液DMEM混合后配置成浓度分别为5%、10%、15%、20%的替格瑞洛含药血清,同时取该病人服用替格瑞洛前的正常血清作为对照,与人胃黏膜上皮细胞株GES-1共同培养24h、48h及72h,采用倒置相差显微镜观察正常对照组GES-1的形态以及各个浓度药物与GES-1细胞共同培养24h后的细胞形态学改变情况、噻唑蓝试剂盒(MTT)测定GES-1细胞活力及增殖情况、流式细胞仪检测各浓度组含药血清与GES-1共培养24h后细胞凋亡情况,细胞免疫荧光法检测各组细胞中Occludin、ZO-1蛋白表达,透射电镜观察对照组和15%含药血清实验组细胞紧密连接结构的变化,蛋白免疫印迹法检测对照组和各浓度药物组细胞中目标蛋白Occludin及ZO-1的表达。结果:倒置相差显微镜下观察发现对照组GES-1细胞数量较多,铺满整个视野,细胞形态规则,外观呈扁平长梭状,而实验组GES-1细胞数目减少,细胞外形变圆或者不规则、可见较多凋亡细胞漂浮于培养瓶内;MTT比色法显示替格瑞洛含药血清对GES-1细胞的损伤随着浓度增加而加重,各浓度组间差异有统计学意义,(P0.05),而同一组细胞不同培养时间下的细胞增殖抑制率无统计学差异(P0.05);流式细胞术检测表明,实验组细胞凋亡率随着药物浓度增加而逐渐增大,各浓度组间差异有统计学意义(P0.05);细胞免疫荧光法显示实验组细胞Occludin、ZO-1表达降低,阳性染色区面积减小,平均光密度值降低:透射电镜观察发现对照组GES-1细胞胞膜完整、细胞间连接结构紧密无缺损,可见桥粒,而实验组细胞间紧密连接结构有缺损破坏,桥粒消失,细胞间隙增大;蛋白免疫印迹实验发现实验组紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达量下降。结论:替格瑞洛作用于人胃黏膜上皮细胞后可抑制其增殖并促进其凋亡,可使紧密连接蛋白Occludin及ZO-1的表达降低,从而损伤胃黏膜屏障。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96

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本文编号：1289420