中药复方牛贝消核提取物对结核分枝杆菌作用机制的研究

发布时间：2017-12-14 21:39

  本文关键词：中药复方牛贝消核提取物对结核分枝杆菌作用机制的研究

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【摘要】：目的:评价牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效;了解结核分枝杆菌标准株H37Rv在Middle brook 7H9液体培养基中的生长规律和牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv增殖的影响;研究牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv蛋白质组的影响,确定牛贝消核作用的关键蛋白,阐明牛贝消核提取物抗结核的作用机制,为发现新的抗结核药物靶标和新药研发提供实验基础。方法:1.牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效评价。对1998年～2012年就诊于四川省内江仁爱医院传染科和内江陈氏诊所的90例结核病患者的临床资料进行回顾性研究。2.牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv增殖的影响。在接种有结核分枝杆菌标准株H37Rv的Middle brook 7H9液体培养基中加入蒸馏水为阴性对照组,加入异烟肼为阳性对照组,加入牛贝消核提取物为实验组,每隔7天取100μL培养物,10倍梯度稀释,涂板,培养3-4周菌落计数(CFU),绘制细菌生长曲线。3.牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv蛋白质组的影响。在培养至对数期的结核菌Middle brook7H9液体培养物中,加入蒸馏水为阴性对照组,加入异烟肼为阳性对照组,加入牛贝消核提取物为实验组,分别于加入药物前以及加入药物后6h和7d取出培养物,应用双向电泳和质谱技术比较分析牛贝消核提取物作用前后结核分枝杆菌标准株H37Rv蛋白表达谱的差异。结果:1.牛贝消核验方治疗结核病的临床疗效评价:治疗1～2个疗程后,汤剂组83例患者中治愈46例(55.42%),显效29例(34.94%),有效6例(7.23%),无效2例(2.41%),总有效率97.59%;散剂组7例患者中,治愈5例(71.43%),显效2例(28.57%),总有效率I00%。2.牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv增殖的影响:培养28天后阴性对照组菌落数增多[(CFUs/ml)Log=5.93±0.11],INH组菌落数为0,牛贝消核提取物组菌落数减少[(CFUs/ml)Log10=4.31±1.09],各组间有显著性差异(P=0.0118,0.01P0.05)。3.牛贝消核提取物对结核分枝杆菌标准株H37Rv蛋白质组的影响:与阴性对照组相比,牛贝消核提取物组有142个差异蛋白斑点,INH组有147个差异蛋白斑点,合计149个;选取其中的71个斑点进行质谱鉴定,得到41个高可信度蛋白,其中INH组有35个(7个上调,28个下调),牛贝消核提取物组有39个(5个上调,34个下调),两组共同差异蛋白为33个。分析其生物学功能,可知:参与免疫反应的有免疫蛋白MPT64(immunogenicproteinMPT64)、角质酶培养滤液蛋白21(CFP21)、富于丙氨酸和脯氨酸的分泌蛋白 Apa(alanine and proline-rich secreted protein Apa);参与蛋白合成的有 50S 核糖体蛋白 L7/L12(50S ribosomal protein L7/L12)、30S 核糖体蛋白 S1(30S ribosomal protein S1)、触发因子(trigger factor)、分子伴侣 GroEL(molecular chaperone GroEL)、热休克蛋白X(heat shock protein hspX);参与能量代谢的蛋白有:磷酸甘油酸变位酶(phosphoglyceromutase)、磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase)、磷酸丙酮酸水合酶(phosphopyruvate hydratase)、转醇醛酶(transaldolase)、腺苷酸激酶(adenylate kinase)、磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)葡萄糖转运蛋白 IIA(glucose transporter subunit IIA)和糖原累积调节蛋白 GarA(glycogen accumulation regulator GarA);参与抗氧化应激的蛋白有:2-半胱氨酸过氧化物还原酶(2-Cys peroxiredoxin)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)和DNA饥饿/固定相保护蛋白(DNA starvation/stationary phase protection protein,Dsp);参与氨基酸合成的蛋白有:磷酸甘油酸脱氢酶(phosphoglycerate dehydrogenase)、γ-谷氨酰磷酸还原酶(gamma-glutamyl phosphate reductase)和 4-轻基-tetrahydrodipicolinate 还原酶(4-hydroxy-tetrahydrodipicolinate reductase);与细菌的应激力有关的蛋白有:热休克蛋白X(heatshockproteinhspX)和普遍应激蛋白家族(Universal stress protein family)。其中抗氧化应激、糖酵解和热休克蛋白等与结核分枝杆菌的潜伏感染有关。结论:1.牛贝消核复方汤剂和散剂治疗结核病疗效显著。2.1mg/ml的牛贝消核提取物能抑制结核分枝杆菌标准株H37Rv的生长。3.牛贝消核提取物可通过抑制结核分枝杆菌的蛋白合成、能量代谢、抗氧化应激,减弱结核分枝杆菌在巨噬细胞中的生存能力,影响其潜伏感染,从而发挥抗结核作用。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R259

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本文编号：1289481