黄芩苷对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用及其机制研究

发布时间：2017-12-16 11:06

  本文关键词：黄芩苷对人卵巢癌SKOV3细胞的抑制作用及其机制研究

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【摘要】：卵巢恶性肿瘤,又称为卵巢癌,是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一,虽然发病率次于宫颈癌和子宫体癌而位居第三,但其死亡率确占女性生殖系统肿瘤致死率的首位。临床上肿瘤的治疗常规以手术、放化疗为主,但由于个人体质差异使的存在,使得上述治疗方法的效果也各不相同。同时由于卵巢癌起病隐匿,确诊晚等情况以及恶性肿瘤普遍存在的转移复发等问题,也加速了卵巢癌治愈率低、死亡率高等现状。随着中医药在治疗疾病方面展现的独特优势,其治病理念即未病先防、辨证论治、整体观念逐渐深入人心,尤其中医、中药在抗肿瘤方面有着靶点多、毒副作用少的优点,越来越受到国内外的重视,因此,寻找安全可靠的抗肿瘤中药复方或中药单体成分,对未来防治肿瘤的发展具有重大意义。本论文共分为两大部分:第一部分为文献综述,主要对卵巢癌的治疗现状、黄芩苷的主要药理作用等方面进行概括总结;第二部分为实验研究,包括黄芩苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响、对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭的影响以及黄芩苷抑制人卵巢癌SKOV3细胞作用的分子机制初探。研究方法:实验一:常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长的细胞均匀种于24孔板中,贴壁24h后,用不同浓度的黄芩苷分别作用于细胞,每个浓度三个复孔。加药处理48h后,通过细胞增殖检测试剂盒,检测黄芩苷是否对卵巢癌细胞具有抑制作用及其最低有效抑制浓度。实验二:常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长的细胞均匀种于6孔板中,分为对照和加药两组,每组三个平行,贴壁24h后,在6孔板内部沿板的长边和短边用力均匀地划3条平行线,人为造成"细胞伤口",两组均加无血清培养基,其中加药组加入实验一中最低有效抑制浓度的黄芩苷,培养48h后,分别观察加药Oh、6h、12h、24h、48h时的细胞伤口愈合程度,分析黄芩苷是否能够抑制卵巢癌细胞的迁移能力。实验三:常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,取对数生长的细胞用无血清培养基稀释后,均匀种于已铺满Matrigel基质胶的24孔Transwell小室内,在下室中加入常规培养基,上、下室分别加入实验一中最低有效抑制浓度的黄芩苷,培养箱中孵育48h,显微镜下观察细胞的侵袭程度,分析黄芩苷是否能够抑制卵巢癌细胞的侵袭能力。实验四:采用蛋白免疫印迹技术(Western Blot,WB),通过对AKT、ERK、STAT3、NF-κB等信号通路相关蛋白以及Vimentin、Bmi1、Oct4、Sox2等肿瘤干细胞标志物蛋白进行检测,探讨黄芩苷抑制人卵巢癌SKOV3细胞的可能分子机制。研究结果:实验一:黄芩苷终浓度分别为0μM、2μM、5μM、10μM、20μM、40μM,与0μM比较,终浓度为2μM、5μM的黄芩苷,抑制作用不明显,均无统计学意义(P0.05)。终浓度为10μM、20μM、40μM的黄芩苷,有抑制作用,均有统计学意义,其中终浓度为10μM、20μM的黄芩苷具有显著差异(P0.01),终浓度为40μM的黄芩苷具有极显著差异(P0.001),因此后面的实验,我们均采用10μM的黄芩苷进行研究。实验二:划痕6h时,与对照组相比,终浓度为10μM的黄芩苷具有抑制划痕愈合的趋势,但无统计学意义(p0.05);划痕12h时,与对照组相比,终浓度为10μM的黄芩苷有抑制划痕愈合的趋势,差异显著,有统计学意义(p0.01);划痕24h时,与对照组相比,终浓度为10μM的黄芩苷能够明显抑制划痕愈合面积,有极显著差异(p0.001);划痕48h时,与对照组相比,终浓度为10μM的黄芩苷有抑制划痕愈合的趋势,有统计学意义(p0.05)。实验三:与对照组相比,终浓度为10μM的黄芩苷组的细胞侵袭数量减少,差异有统计学意义(P0.05)。实验四:与对照组相比,在终浓度为10μM黄芩苷的作用下,人卵巢癌SKOV3细胞中 p-AKT、p-ERK、p-STAT3、p-p65、p-IκB、Vimentin、Bmi1、Oct4、Sox2 等蛋白的表达明显减少。研究结论:1、10μM-40μM的黄芩苷能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,且在该范围内其抑制作用具有剂量依赖性。2、10μM的黄芩苷能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞的迁移能力。3、10μM的黄芩苷能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力。4、AKT、ERK、STAT3、NF-κB等通路的异常激活,可能促使人卵巢癌SKOV3细胞发生上皮间质转化(EMT),进而影响卵巢癌干细胞干性,使得其表面标志物Vimentin、Bmi1、Oct4、Sox2等蛋白的表达异常升高。5、黄芩苷通过抑制p-AKT、p-ERK、p-STAT3、p-p65、p-IκB等蛋白的磷酸化,抑制AKT、ERK、STAT3、NF-κB等信号通路的激活,起到逆转EMT过程、影响卵巢癌干细胞干性的作用。研究意义:本实验研究结果为中药有效成分抑制卵巢癌细胞增殖机制提供了理论与实验依据;有望为中药在防治卵巢癌转移、复发、耐药的作用上提供实验研究方向。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：1295779