白藜芦醇对鼻咽癌细胞放疗增敏的研究

发布时间：2017-12-17 03:00

本文关键词：白藜芦醇对鼻咽癌细胞放疗增敏的研究

【摘要】：目的:研究白藜芦醇(Resveratrol,RSV)对鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)细胞放射治疗增敏的分子机制。为白藜芦醇后续在临床上的应用提供实验基础。方法:1.白藜芦醇对鼻咽癌细胞活力和增殖的影响1.1 MTT法检测白藜芦醇对鼻咽癌细胞活力的影响。1.2不同浓度白藜芦醇作用于鼻咽癌细胞后用克隆形成实验计算克隆形成率。1.3不同浓度白藜芦醇作用于鼻咽癌细胞后用流式细胞仪检测各组细胞周期。2.白藜芦醇对鼻咽癌细胞放射治疗增敏的作用2.1白藜芦醇对鼻咽癌细胞放射治疗后生存率的影响,利用线性二次模型(LQ),根据SF值制作放射敏感曲线。2.2流式细胞仪检测鼻咽癌细胞经放射治疗后细胞凋亡。3.白藜芦醇对放射增敏相关蛋白表达的影响3.1免疫印迹实验检测白藜芦醇作用鼻咽癌细胞放射治疗后相关蛋白的表达情况。3.2免疫印迹实验检测不同剂量白藜芦醇作用鼻咽癌细胞后对相关蛋白表达的影响。3.3免疫印迹实验检测白藜芦醇作用鼻咽癌细胞不同时间段后对相关蛋白表达的影响。3.4在鼻咽癌细胞内利用慢病毒下调E2F1基因来研究白藜芦醇对鼻咽癌细胞的影响。3.5在鼻咽癌细胞内利用慢病毒过表达E2F1基因来研究白藜芦醇对鼻咽癌细胞的影响。4.体内实验:通过裸鼠荷瘤模型研究白藜芦醇对鼻咽癌细胞放射增敏的作用结果:1.白藜芦醇对鼻咽癌细胞活力和增殖的影响1.1 MTT法检测不同浓度的白藜芦醇作用鼻咽癌细胞后,浓度为25 μmoL/L和50μmoL/L的白藜芦醇作用24小时后对细胞活力没有明显影响。1.2浓度为50 μmoL/L的白藜芦醇处理鼻咽癌细胞24小时后可明显抑制细胞形成克隆的能力。1.3白藜芦醇处理细胞后,G0/G1期的细胞比例从33.40%上升到69.70%、81.68%,说明白藜芦醇能使鼻咽癌细胞阻滞在G0/G1期。1.4结合上面的结果,选用浓度为50 μmoL/L的白藜芦醇,处理时间为24小时,进行后续实验。2.白藜芦醇对鼻咽癌细胞放射治疗增敏的作用2.1克隆形成率随辐照剂量加大而降低。2.2白藜芦醇联合放射治疗后提高了鼻咽癌细胞细胞凋亡率。3.白藜芦醇对放射增敏相关蛋白表达的影响3.1 50 μmoL/L的白藜芦醇可以抑制E2F1的表达,下调p-AKT,但是对p-ERK没有影响。3.2白藜芦醇对E2F1、p-AKT的影响呈剂量效应,对p-ERK无影响。3.3白藜芦醇对E2F1、p-AKT的影响呈时间效应,对p-ERK无影响。3.4利用慢病毒构建了下调E2F1表达的的稳定细胞系CNE-1-shE2F1及其对照株CNE-1-NC,WB检测出E2F1的表达可明显影响p-AKT的表达水平,但对p-ERK无影响;通过单克隆形成实验检测CNE-1-shE2F1及其对照株CNE-1-NC的克隆形成能力观察到CNE-1-shE2F1的克隆形成率明显低于CNE-1-NC;流式细胞技术检测CNE-1-shE2F1及其对照株CNE-1-NC的周期变化,结果显示细胞周期阻滞在G0/G1期。3.5利用慢病毒构建了过表达E2F1表的的稳定细胞系CNE-1-E2F1及其对照株CNE-1-NC,用50μmoL/L的白藜芦醇处理后,免疫印迹实验检测出在CNE-1中过表达E2F1,可以明显抑制白藜芦醇引起的p-AKT表达水平,对p-ERK无影响;克隆形成检测结果表明,在鼻咽癌细胞中过表达E2F1可抑制白藜芦醇引起的克隆形成率;流式细胞技术检测细胞周期表明,在鼻咽癌细胞中过表达E2F1可抑制白藜芦醇引起的G0/G1周期阻滞。4.体内实验表明白藜芦醇和放射治疗联合后其控制肿瘤体积和体重的效果非常显著,说明白藜芦醇可以增强鼻咽癌细胞对放射治疗的敏感性。结论:本实验研究结果表明,白藜芦醇可以增强鼻咽癌细胞对放射治疗的敏感性,其机制可能是白藜芦醇作用细胞后通过下调E2F1和抑制p-AKT来达到放射增敏的效果。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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