石见穿抗人免疫缺陷病毒作用及其有效部位的研究

发布时间：2017-12-20 20:07

  本文关键词：石见穿抗人免疫缺陷病毒作用及其有效部位的研究　出处：《广州中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:将石见穿进行分离提取,从中筛选出具有抗HIV作用的有效化合物。方法:用75%工业酒精对石见穿进行回流,再依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇对乙醇提取部位进行萃取。体外细胞实验从中初步筛选出抗HIV的粗提取物,将石见穿有效粗提取部位通过硅胶柱色谱洗脱,薄层色谱分析,香草醛显色,以及高效液相色谱仪制备,核磁共振鉴定结构等药物提取分离的方法分离出有效化合物。体外筛选有效成分的指南为以HIV感染CEMx174细胞的药效实验,在显微镜下观察细胞病变效应、再用实时荧光定量PCR检测萃取的部位是否对HIV的细胞内HIVRNA相对量和上清中的病毒载量具有抑制作用。统计学方法为先将定量PCR运行后的文件用ABI7300定量PCR仪所携带的软件进行分析,采用Excel建立数据库。之后使用SPSS17.0统计软件进行统计分析,检验方法采用单向方差分析,假如方差齐则使用LSD法分析,若方差不齐则使用Kruskal-Wallis H方法分析,检验标准为α=0.05。制图软件选用GraphPad Prism 5.0。结果:萃取得到石见穿的粗提物,经体外细胞感染HIV药效实验表明:从不同部位的不同浓度给药组中,石见穿氯仿部位浓度为20μg/ml的细胞内HIVRNA相对量明显较病毒对照组低(P0.05),且与阳性对照组比较(P=0.1280.05),说明浓度为20μg/ml时与阳性对照组相比无差异,同时,其上清中病毒载量明显低于病毒对照组(P0.05),与阳性对照组相比(P=0.6110.05),说明上清浓度为20μg/ml时与阳性对照组相比也无差异。将石见穿有效粗提取部位通过硅胶柱色谱洗脱,薄层色谱分析,香草醛显色,以及高效液相色谱仪制备,核磁共振鉴定结构分离出抗HIV有效化合物22-23流份黄绿色粉末为熊果酸。石见穿的氯仿部位提取分离经体外药效实验显示22-23流份,5-6流份有效;RT-PCR结果表明给药组石见穿氯仿部位分离得到的22-23流份、5-6流份细胞内HIVRNA相对量明显较病毒对照组低(P0.05),且与阳性对照组比较(P0.05),同时,其上清中病毒载量明显低于病毒对照组(P0.05),与阳性对照组相比(P0.05)说明与阳性对照组相比无差异。结论:石见穿氯仿部位对HIV-1具有抑制作用,石见穿氯仿部位分离物得到的22-23流份即熊果酸,5-6流份为抗HIV作用的主要有效化合物。
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

【参考文献】

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1 彭R，

本文编号：1313234