MicroRNA-30a通过抑制Beclin1介导的自噬来减缓肝纤维化进程

发布时间：2017-12-20 21:01

  本文关键词：MicroRNA-30a通过抑制Beclin1介导的自噬来减缓肝纤维化进程　出处：《南京医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:在这项研究中,我们旨在探讨微小RNA-30a(miR-30a)在肝纤维化中的作用及其可能的作用机制。材料和方法:我们通过转化生长因子-β1(TGF-β1)处理肝星状细胞(大鼠肝星状细胞HSC-T6,人肝星状细胞LX-2)构建体外肝纤维化模型;我们通过在C57BL/6小鼠体内进行胆管结扎或者腹腔注射四氯化碳构建体内肝纤维化模型。我们通过在肝星状细胞中转染miR-30a mimics使肝星状细胞中高表达mmiR-30a;通过在小鼠体内注射miR-30a agomir(ago-miR-30a)使小鼠体内高表达miR-30a。通过miRNA定量探针检测miR-30a在肝星状细胞内和小鼠体内的表达水平。通过荧光原位杂交技术(FISH)检测miR-30a在肝星状细胞内的定位情况。通过双荧光素酶试验验证Beclin1是miR-30a的直接靶点。通过mRFP-GFP-LC3自噬双荧光、电镜和蛋白质印迹检测肝星状细胞自噬水平。结果:miR-30a在活化的肝星状细胞和TGF-β 1诱导的人肝星状细胞LX-2的外泌体中表达明显下调。过表达miR-30a使细胞外基质(ECM)的表达下调,例如a-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ);同时miR-30a过表达抑制了肝星状细胞的细胞活力。mmiR-30a在肝纤维化模型小鼠中表达显著下调,然而,过表达miR-30a能抑制胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化进程,伴随细胞外基质(ECM)表达的下调。miR-30a抑制肝星状细胞内和小鼠纤维化肝组织中的肝星状细胞的自噬,同时促进了肝星状细胞中脂滴的积聚。miR-30a通过直接靶向结合Beclin1的3'-UTR区域,从而抑制靶基因Beclin1的表达。此外,通过小干扰RNA(siRNA)沉默Beclin1的表达同样能抑制人肝星状细胞LX-2的自噬,并能抑制人肝星状细胞LX-2的活化。结论:miR-30a在肝纤维化模型中表达下调,过表达miR-30a能通过直接抑制Beclin1介导的肝星状细胞自噬来抑制肝纤维化进程。因此,miR-30a可能是用于调控肝纤维化的新的潜在的治疗靶点。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.2

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本文编号：1313376