大鼠髁突软骨细胞的培养鉴定及静水压力下凋亡蛋白的变化

发布时间：2017-12-24 13:33

  本文关键词：大鼠髁突软骨细胞的培养鉴定及静水压力下凋亡蛋白的变化　出处：《新疆医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:探索大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞的培养方法;研究细胞在不同静水压力作用下TRPM7和Fas蛋白的表达变化规律,探讨Fas通道和TRPM7途径是否在MCCs凋亡中发挥作用。方法:分离Wistar大鼠髁突软骨,用II型胶原酶消化法结合组织块法获取干细胞,MTT检测其生长曲线,甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫组化法和II型胶原免疫荧光法鉴定软骨细胞来源。取生物学性能最佳的一代细胞,随机分为2组。实验组给予细胞不同大小和时长的静水压力;对照组除不加压外其余培养条件相同。加压结束后,立即通过Western Blot检测每组TRPM7和Fas的蛋白量。结果:II型胶原酶消化法结合组织块法消化髁突软骨组织18~20小时可获得最大量细胞;形态学观察软骨细胞主要呈多角形,第1~4代细胞具有稳定的生物学特性,5代及以后逐渐出现衰老细胞;MTT测第3代细胞最快达对数生长期;甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫组化染色及II型胶原免疫荧光染色均表达阳性,提示MCCs来源于软骨的可靠性。加压时间为1h/2h时,6Kpa、8Kpa、10Kpa实验组的Fas蛋白量均低于对照组,P0.05;当压力值为20Kpa/2h、30Kpa/1h、30Kpa/2h时,实验组蛋白高于对照组,P0.05。当压力为20KPa/1h时,对照组蛋白与实验组无差异,P0.05。加压时间分别为1h/2h时,6Kpa、8Kpa、10Kpa、20Kpa实验组的TRPM7蛋白量均低于对照组,P0.05。当压力值为30Kpa/2h时,实验组蛋白高于对照组,P0.05。当压力值为30Kpa/1h时,两组蛋白无差异,P0.05。结论:II型胶原酶联合组织块消化法获取的干细胞来源可靠。较小压力值和时间作用下凋亡蛋白表达下降,提示可能对软骨细胞的凋亡有抑制作用。压力值超过一定界值或延长加压时间后,细胞凋亡蛋白增加,提示此条件可能对软骨细胞的凋亡有促进作用。两通道均有可能参与异常压力下MCCs的凋亡,为进一步研究TMD病因机制提供思路。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R782.6

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本文编号：1328569