生半夏及干姜人参半夏方对小鼠胚胎发育及mESC分化的影响

发布时间：2017-12-25 23:05

本文关键词：生半夏及干姜人参半夏方对小鼠胚胎发育及mESC分化的影响　出处：《南京中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：胎儿期安全用药对保证儿童健康生长发育有着至关重要的作用,中医药学很早就意识到胎儿期保健的重要意义,并且形成了比较系统实用的与胎儿期保健相关的养胎理论和方法,"妊娠禁忌药"的确立便是其中之一。生半夏作为传统的"妊娠禁忌药"在胎儿期的使用一直备受争论,然医圣张仲景所创的"干姜人参半夏丸"作为治疗妊娠恶阻的代表方一直被后世沿用至今。干姜人参半夏方在治疗孕妇妊娠恶阻时,是否会因应用"妊娠禁忌药"生半夏而造成"损胎、碍胎",生半夏本身的胚胎毒性如何,其配伍后形成的干姜人参半夏方是否会通过配伍得到减毒或无毒,干姜人参半夏汤在胎儿期使用的安全性如何,均有待更加客观的科学论据支持。本实验研究是国家自然科学基金青年基金项目--"基于蛋白质组学方法研究半夏对胚胎发育的影响及配伍减毒机制"的一部分实验内容,通过采用致畸敏感期生殖毒性实验,探索生半夏汤、干姜人参半夏汤对妊娠小鼠母体及胚胎发育的影响;同时通过建立小鼠胚胎干细胞(mESC)体外实验模型,采用生半夏汤(粉)、干姜人参半夏汤(粉)不同的含药血清进行干预培养,研究其对mESC分化的影响,以期探索生半夏对胚胎发育的影响及干姜人参半夏方在胎儿期使用的安全性。目的1.总结体内实验、体外实验在中药胚胎毒性研究中的应用;总结生半夏、干姜人参半夏方在胚胎毒性研究中的进展。2.探索生半夏汤、干姜人参半夏汤对妊娠小鼠母体及胚胎发育的影响。3.比较生半夏汤(粉)、干姜人参半夏汤(粉)含药血清对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化成心肌细胞的影响。4.探讨生半夏、干姜人参半夏方应用于妊娠期治疗妊娠恶阻时对胎儿的影响及其用药的安全性。方法1.采取致畸敏感期生殖毒性实验方法,在张仲景用量的4倍剂量下,比较生半夏汤、干姜人参半夏汤对妊娠小鼠母体心脏、肝脏、肾脏的影响及对小鼠妊娠及胚胎发育的影响,用SPSS19.0软件进行结果分析。2.采取经典的悬滴三步法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),对形成的拟胚体(EBs)用生半夏汤含药血清、干姜人参半夏汤含药血清、生半夏粉含药血清、干姜人参半夏粉含药血清、空白组血清、胎牛血清(FBS)六组不同的血清培养14d后,比较其对mESC分化时全能性蛋白Cont3及心肌特异性蛋白TnT表达的影响,用PhotoshopCS5及SPSS19.0软件进行结果分析。结果1.以生半夏汤剂量2.275 g·kg-1及干姜人参半夏汤剂量5.688 g·kg-1对致畸敏感期孕鼠给药10 d后,母鼠的心、肝、肾脏病理评分与正常组相比无显著差异;生半夏汤组妊娠18 d母体体重与正常组比较明显降低(P0.05);孕期母体宫外增重、子宫连胎仔重及胎仔指标与正常组相比稍低,但无统计学差异。干姜人参半夏汤组的各项指标与正常组相比均无显著性差异。2.以生半夏汤(粉)、干姜人参半夏汤(粉)含药血清、空白组血清、FBS培养EBs 14d后,比较各组Cont3蛋白的表达水平。与FBS组相比,生半夏汤组、生半夏粉组Cont3表达明显上调(P0.01),干姜人参半夏汤组、干姜人参半夏粉组则无显著差异;与生半夏汤组相比,干姜人参半夏汤组Cont3表达稍有下调,但无统计学差异;与生半夏粉组相比,干姜人参半夏粉组Cont3表达明显下调(P0.05)。3.以生半夏汤(粉)、干姜人参半夏汤(粉)含药血清、空白组血清、FBS培养EBs 14d后,比较各组TnT蛋白的表达水平。与FBS组及空白组相比,生半夏汤组TnT表达明显下调(P0.05),生半夏粉组TnT表达明显下调(P0.01),干姜人参半夏汤组、干姜人参半夏粉组无显著差异;与生半夏汤组相比,干姜人参半夏汤组TnT表达明显上调(P0.05);与生半夏粉组相比,干姜人参半夏粉组TnT表达明显上调(P0.01)。结论1.在本实验剂量下,生半夏汤及干姜人参半夏汤无胚胎毒性,但生半夏汤会引起孕鼠母体体重的降低。2.生半夏汤(粉)含药血清可能通过抑制体外mESC向心肌细胞的分化而产生胚胎毒性,干姜人参半夏汤(粉)含药血清则对mESC向心肌细胞的分化无显著影响,推测在本实验条件下干姜人参半夏方无明显胚胎毒性。3.生半夏作为"妊娠禁忌药"在胎儿期不建议单独使用,干姜人参半夏方未见明显胚胎毒性,在胎儿期可通过辨证安全使用。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

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