基于Nrf2信号通道研究芹菜素对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用

发布时间：2018-01-13 05:03

本文关键词：基于Nrf2信号通道研究芹菜素对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用　出处：《南京中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:以C57BL/6小鼠为研究对象,研究芹菜素对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用;通过比较小鼠视网膜氧化损伤程度的差异以及药物干预前后Nrf2及相关下游靶基因酶的研究,探明Nrf2信号通道在干性AM)发病过程中起的作用以及芹菜素防治干性AMD的作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分成五组:正常对照组、模型对照组、给药组;模型对照组..高脂饮食+氢醌造模,通过造成小鼠视网膜氧化损伤,模拟干出干性AMD的动物模型;给药组芹菜素的剂量为:芹菜素低剂量组l00mg/kg/d,中剂量组200mg/kg/d,高剂量组400mg/kg/d;采取电镜扫描方式,观察RPE下沉积物厚度和宽度、Bruch膜厚度,评价造模情况及芹菜素对氧化损伤小鼠视网膜的保护作用;利用比色法测定出小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量;利用荧光定量PCR、western blot检测芹菜素对正常动物、模型动物干预后视网膜Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL的转录及表达。结果:电镜下观察实验小鼠视网膜RPE发生改变,RPE层下可见大量脂性堆积物,Bruch膜明显增厚,出现与AMD相类似的典型病理改变,表明造模成功。小鼠经过芹菜素哥剂量灌胃后,与模型对照组相比,低、中、高剂量组小鼠血清中总ROS水平均明显降低(低、中、高剂量组均P0.01),血清中MDA含量亦显著降低(低、中、高剂量组均P0.01),浓度越高降低越明显,呈剂量依赖关系。说明芹菜素可以降低血清中总ROS和MDA的含量,可以改善模型小鼠视网膜的氧化应激状态,减少活性氧及各种氧自由基对小鼠视网膜的损伤。Western Blot结果显示,经高脂饮食+氢醌造成氧化应激后,细胞质内的Nrf2蛋白表达明显减少,而细胞核内Nrf2蛋白表达明显增高,证实了在受到氧化应激时,Nrf2会在核内发生转移,使自身处于氧化应激状态。并且PCR检测Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表达水平结果显示:与正常对照组相比,模型组Nrf2、HO-1、NQO-1、GCLmRNA表达水平明显升高(P0.01),说明高脂饮食+氢醌造模使小鼠机体处于氧化应激状态,从而激活Nrf2通道,激发自身释放Ⅱ相酶发挥抗氧化作用;经芹菜素治疗后,与模型对照组相比,给药组的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCL mRNA表达水平均有所下降,提示这可能与模型组受到氧化刺激后,体内产生了强烈的氧化应激状态,为了是自身处于稳定状态,保护视网膜免受氧化损伤有关。结论:高脂饮食+氢醌喂养,可以成功制造氧化损伤小鼠视网膜模型,通过观察RPE的改变、RPE下沉积物及Bruch膜厚度情况,证明该造模方法可以成功模拟干性AMD的动物模型;芹菜素可以提高氧化损伤小鼠血清中抗氧化酶的活性,降低血清总活性氧(R0S)及丙二醛(MDA)的含量,从而发挥抗氧化应激作用,而且呈现剂量依赖性;芹菜素治疗后,与模型对照组相比,给药组的Nrf2、HO-1、NQO-1、GCLmRNA表达水平均有所下降,可能是芹菜素对于模型小鼠体内氧化/抗氧化失平衡的状态,代偿性的减少了 Nrf2等蛋白的表达以增加机体的抗氧化能力,进而调节小鼠体内环境平衡,减少氧化应激所致的损伤。经过芹菜素治疗后,小鼠血清中总ROS水平均明显降低,血清中自由基代谢产物MDA含量亦显著降低,SOD、GSH-Px、CAT的活性明显提高,说明芹菜素具有清除机体自由基的能力,显示机体的抗氧化能力明显的提高,这为防治干性AMD提供了有效的契机。
[Abstract]:Objective : To study the protective effects of apigenin on the retina of mice with oxidative damage induced by oxidative damage in C57BL / 6 mice . The mechanism of Nrf2 signal pathway in the pathogenesis of dry AM was studied by comparing the degree of retinal oxidative damage and the study of Nrf2 and related downstream target genes . Methods : C57BL / 6 mice were randomly divided into five groups : normal control group , model control group , administration group , model control group . The contents of serum SOD , GSH - Px , CAT activity and ROS and MDA in mice were observed under electron microscope . The results showed that the contents of SOD , GSH - Px , CAT activity and ROS and MDA in serum of mice were significantly lower than those in the control group . Conclusion : Compared with the control group , the expression level of Nrf2 , HO - 1 , NQO - 1 and GCL mRNA in the model group decreased significantly ( P0.01 ) . The MDA content of free radical metabolites in serum was significantly decreased , and the activities of SOD , GSH - Px and CAT increased significantly , indicating that apigenin had the ability to scavenge free radicals of organism , and showed that the anti - oxidation ability of the organism was obviously improved , which provided an effective opportunity for the prevention and treatment of dry AMD .

【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R774

【参考文献】