栀子水提液及栀子苷对OGD-Rep损伤的SH-SY5Y细胞保护作用及机制研究
发布时间：2018-01-16 12:02
本文关键词：栀子水提液及栀子苷对OGD-Rep损伤的SH-SY5Y细胞保护作用及机制研究 出处：《北京中医药大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：缺血性中风是指突然发生的脑血流供应障碍引起缺血缺氧,导致局限性脑组织缺血性坏死或脑软化的疾病。如果缺血性中风在最佳治疗时间窗内得不到有效治疗,严重者会留下视力障碍、语言丧失、瘫痪和意识错乱等不同程度的功能障碍,甚至导致死亡,严重危害人类的健康。中医药防治缺血性中风有独特优势,且医学界已公认缺血性中风是中医学防治的优势病种。课题组在研究缺血性中风方面已积累了经验,发现清开灵、精制清开灵对缺血性中风模型大鼠有很好的疗效,其中栀子、栀子苷作为主要成分发挥了重要作用。缺血性中风的发病过程中,除了炎症、局部淤血刺激以外,神经细胞损伤、凋亡是非常重要的发病环节。并且在脑缺血后由于能量障碍引起的神经细胞损伤、凋亡的机制研究中,内质网应激、自噬所扮演的角色越来越受到重视。内质网应激与自噬在缺血性中风的病理机制中各自独立却又密切联系,目前多数研究认为,内质网应激可以促进自噬流,反过来,自噬可以减弱内质网应激。这可能与自噬清除多余的废弃蛋白从而减弱内质网应激有关。目前有一种假说认为自噬通过减弱过度的内质网应激从而对抗神经元凋亡。本课题主要从细胞水平研究栀子及其代表性成份栀子苷对能量障碍损伤的神经细胞的保护作用,并初步探讨栀子苷对细胞凋亡、内质网应激、自噬的调节机制,希望为栀子、栀子苷的神经保护作用提供更多的科学依据。1目的1.1摸索栀子水提液、h斪榆斩許H-SY5Y细胞毒性及其给药剂量范围1.2观察栀子水提液、栀子苷对正常及OGD-Rep损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用。1.3探讨栀子苷的神经保护作用是否与抗凋亡、干预内质网应激、自噬相关。2方法2.1利用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y建立OGD-Rep模型2.2运用CCK-8法检测细胞存活率2.3 JC-1染色检测细胞凋亡情况。Western blot法检测caspase12蛋白表达。2.4 Western blot 法检测 Bip/GRP78、CHOP 蛋白表达。2.5 吖啶橙(Acridine Orange,AO)、MDC(Dansylcadaverine)荧光染色法检测细胞内自噬水平。间接免疫荧光法检测各组细胞LC3Ⅱ、P62蛋白表达,Western blot法检测LC3Ⅱ、P62蛋白表达。3结果3.1栀子水提液、栀子苷的细胞毒性检测3.1.1 CCK8法检测细胞活力结果显示,0.1 μ g/mL、1 μ g/mL低浓度的栀子水提液可提高正常细胞的活性,促进其生长(P0.05);而2000 μg/mL栀子水提液对正常细胞表现出抑制作用(P0.001)。3.1.2 CCK-8检测结果显示,栀子苷各浓度组细胞活力与正常组比较无显著差异。3.2对糖氧剥夺-复糖复氧(OGD-Rep)细胞模型的活力影响3.2.1栀子水提液、栀子苷对OGD12h-Rep2h细胞模型的活力影响① 10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 栀子水提液组细胞活力较模型组细胞活力显著增强(P0.05),并且细胞活力的增强与药物的浓度有剂量依赖性关系,栀子水提液的浓度越高,细胞活力增强越明显。②1μg/mL栀子苷、10μg/mL栀子昔组细胞活力与模型组无显著差异,100μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL栀子苷组细胞活力较模型组增强,有统计学差异(P0.05)。3.2.2h斪榆斩圆煌奔銸GD-Rep诱导损伤的细胞活力影响。①OGD6h-Rep2h,细胞损伤程度非常轻,1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL的栀子苷组与模型组比较细胞活力显著增强(P0.05),500 μ g/mL栀子苷组、1000 μ g/mL栀子苷组及阳性药依达拉奉组细胞活力与模型组比较没有显著增强。②OGD9h-Rep2h,损伤程度较6h重,此时阳性药依达拉奉依然没有表现出保护作用,1μg/mL栀子苷的保护作用消失,10μg/mL栀子苷组、100μg/mL栀子苷组、500μg/mL栀子苷组、1000 μg/mL栀子苷组与模型组比较细胞活力显著增强P0.05),且随着栀子苷浓度的增高,对SH-SY5Y保护作用越明显。③OGD11h-Rep2h,损伤程度较9h更重,阳性药依达拉奉组细胞活力高于模型组,1 μ g/mLh斪榆盏谋；ぷ饔孟，
本文编号：1433004
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