紫草素对Cx32组成的宫颈癌Hela细胞缝隙连接功能的影响

发布时间：2018-01-24 19:38

  本文关键词： 紫草素 缝隙连接蛋白32(Cx32) 细胞缝隙连接(GJ) 顺铂　出处：《新疆医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:在转染并稳定表达缝隙连接蛋白Cx32的宫颈癌Hela细胞上,观察紫草素对缝隙连接GJ功能和缝隙连接蛋白Cx32的表达水平的影响,以及对顺铂细胞毒性作用的影响。方法:采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法对转染并稳定表达Cx32的Hela细胞系进行验证;CCK-8法测定用于研究GJ功能作用的紫草素浓度;用细胞接种荧光示踪法(Parachute assay)观察不同浓度紫草素对GJ功能的影响;用蛋白免疫印迹(Western-blot)法研究紫草素对缝隙连接蛋白Cx32的蛋白表达的影响。用标准集落形成法(standard colony-forming assay)测定紫草素对顺铂细胞毒性的影响。结果:用多西环素培养的细胞有Cx32扩增,也有Cx32的表达,没有用多西环素的细胞没有Cx32扩增,也没有Cx32的表达;对于不用多西环素诱导的细胞,即无Cx表达时,紫草素4μM浓度以下对Hela细胞无毒性作用;用多西环素诱导的细胞,紫草素3μM浓度以下对Hela细胞无毒性作用;紫草素处理组细胞间荧光传递量在1-3μM随浓度的增加而增加;紫草素在(1-3μM)能浓度依赖性增强GJ功能及Cx32的表达。在有GJ形成时,3μM紫草素可以增强顺铂降低细胞集落形成率的作用。结论:验证Cx32质粒转染成功,构建了可调控表达Cx32的细胞系。紫草素能增强Cx32组成的GJ功能。紫草素对GJ功能的增强作用与Cx32的表达有关。在有GJ形成的Hela细胞(生长融合),3μM紫草素可以增强顺铂的细胞毒性作用,有增敏的作用。在有GJ形成的Hela细胞(生长融合),紫草素可以增强顺铂的细胞毒性作用,具有增敏效果。
[Abstract]:Objective: to observe the effect of porphyrin on the function of gap junction GJ and the expression of gap junction protein Cx32 in cervical cancer Hela cells transfected and stably expressed gap junction protein (Cx32). Methods: the Hela cell lines transfected and stably expressed Cx32 were confirmed by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot. CCK-8 method was used to determine the concentration of porphyrin used to study the function of GJ. The effects of different concentrations of porphyrin on the function of GJ were observed by fluorescence tracer method. The effect of porphyrin on the expression of gap junction protein Cx32 was studied by Western blot assay. Standard colony-forming assay was used to determine the toxicity of porphyrin to cisplatin cells. Results: the cells cultured with doxycycline were amplified by Cx32. There was also Cx32 expression and no Cx32 amplification or Cx32 expression in cells without doxycycline; For the cells without doxycycline, that is, without CX expression, the concentration below 4 渭 M of porphyrin had no toxic effect on Hela cells. The cells induced by doxycycline had no toxic effect on Hela cells under the concentration of 3 渭 M of porphyrin. The fluorescence transfer between cells increased with the increase of concentration at 1-3 渭 M in the porphyrin treated group. Porphyrin could enhance the function of GJ and the expression of Cx32 in a concentration-dependent manner. 3 渭 M porphyrin could enhance the effect of cisplatin on cell colony formation. Conclusion: Cx32 plasmid transfection was successful. A cell line was constructed to regulate the expression of Cx32. Porphyrin can enhance the GJ function of Cx32. The enhancement of Rhizoctonin on GJ function is related to the expression of Cx32. Cells (. Growth and fusion). 3 渭 M porphyrin could enhance the cytotoxicity of cisplatin and enhance the sensitivity of cisplatin. In Hela cells formed with GJ (growth fusion), porphyrin could enhance the cytotoxicity of cisplatin. It has the effect of sensitizing.
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：1460860