肝郁证雄性大鼠性腺轴的变化及疏肝方与补肾方干预效应的比较

发布时间：2018-02-11 01:59

本文关键词： 肝郁证雄性性腺轴柴胡疏肝散五子衍宗丸作用机制　出处：《北京中医药大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：大量研究表明中医证候的现代内涵涉及多系统的病理生理变化。肝郁证涉及包括神经、内分泌、免疫、消化、血液在内的多系统异常。基于中医肝脏与现代生殖系统相关和临床肝郁证常涉及男性生殖系统疾病的背景,提出男性肝郁证可能涉及现代性腺功能调节异常的概念,在前期束缚肝郁证大鼠模型研究的基础上,动态观察了模型大鼠复制不同阶段的肝郁证候及性腺轴的变化;基于方证相关的原理,比较观察中医疏肝方(柴胡疏肝散)、补肾方(五子衍宗丸)及抗抑郁西药(盐酸氟西汀)对该模型大鼠肝郁证候及性腺功能损伤的防治效应;并从分子层面进一步探查相关方药对肝郁证大鼠睾丸损伤的保护作用机制。研究一肝郁证模型大鼠的性腺功能状态及其变化方法:健康雄性wistar大鼠60只,体重210±10g,随机分为正常对照组30只和模型组30只。模型组按照每天束缚桶束缚3h,共4周的方法,复制肝郁证模型;正常对照组不予处理。分别于实验第2周末、第3周末、第4周末从正常组和模型组中随机抽取10只大鼠,10%水合氯醛(0.30ml/100g体重)腹腔麻醉,经腹主动脉采血并取睾丸及下丘脑等组织。检测指标:(1)肝郁证相关的神经-内分泌指标:下丘脑5-羟色胺(5-HT)、血清去甲肾上腺素(NE)、血清皮质酮(CORT);(2)性腺功能指标:1)血清性激素:促性腺激素释放激素(GnRH)、促黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、雌二醇(E2);2)性腺器官:睾丸湿重及脏器指数、睾丸HE观察。每周观察并记录各组大鼠一般外观表征(行为状态、活跃程度、情绪反应、饮食状态等)及体重的变化。结果:(1)肝郁证模型大鼠中医证候学相关指标的变化:与正常组相比,模型组大鼠第2周、第3周、第4周的行为状态、活跃程度、情绪反应和饮食情况的评分均明显升高,体重1周末～4周末均显著降低(p0.01);下丘脑5-HT水平2周末明显降低,3周末和4周末明显升高(p0.01);血清NE和C0RT水平在2周末～4周末均明显升高(p0.01或p0.05)。(2)肝郁证模型大鼠性腺功能的变化:与正常组相比,模型组大鼠的血清GnRH在2周末和3周末均明显增高(p0.01),4周末明显降低(p0.01);FSH、LH在2周末～4周末均明显降低(p0.01或p0.05),PRL、E2在2周末～4周末均明显升高(p0.01或p0.05),T在3周末和4周末明显降低(p0.01);睾丸重量在2周末～4周末均明显下降,病理损伤评分2周末～4周末明显升高(p0.01或 p0.05)。结论:慢性束缚应激法复制4周的肝郁证模型大鼠表现出与中医肝郁证类似的外观变化和相关实验室指标的异常,并伴有性腺轴功能的调节异常和睾丸的损伤。随着造模时间的延长,模型大鼠呈现血中GnRH、T、LH和FSH/PRL和E2则分别持续降低/升高,睾丸病理损伤逐渐加重的特点。提示下丘脑可能是肝郁证发展中性腺轴调节紊乱的主要部位。研究二疏肝方与补肾方对肝郁证雄性大鼠性腺功能的调节作用及机制方法:健康雄性wistar大鼠69只,体重210±10g,随机分为正常对照组12只,造模组57只。正常对照组不予处理,造模大鼠按照上述方法复制肝郁证模型。于造模第2周末(即造模第14天)将造模大鼠随机分为模型组12只、柴胡疏肝散大剂量组(柴大组)12只、柴胡疏肝散小剂量组(柴小组)12只、氟西汀组(西药组)9只、五子衍宗丸组(补肾组)12只。其中柴大、小剂量组分别按1.24g/kg和0.31g/kg(相当于70kg体重成人用量的2倍和0.5倍)给予柴胡疏肝散,西药组按1.8mg/kg(相当于70kg体重成人用量)给予盐酸氟西汀,补肾组按1.08g/kg(相当于70kg体重成人用量)给予五子衍宗丸。每日1次,连续灌胃两周。实验第4周末处死动物及采样,检测指标:(1)肝郁证相关指标:1)外观行为学指标(同上)和旷场试验;2)证候相关的神经-内分泌指标:下丘脑5-HT,血清NE、E、Ach、C0RT。(2)性腺轴相关指标:血清GnRH、FSH、LH、T、E、PRL;睾丸湿重及脏器指数、睾丸HE病理观察。(3)睾丸生化及分子指标:1)线粒体 SOD、MDA、CytC 及 8-OHdG;2)睾丸 PKA、ERK、STAR 及 Cypllal。结果:(1)证候学变化:1)行为学变化:与正常组相比,模型组大鼠第2周～第4周的各组行为评分均明显升高,体重明显降低(p0.01);第2周旷场试验中的爬格数、爬行里程数及中央格停留时间均明显增加(p0.01),第4周旷场试验中的爬格数、爬行里程数明显减少,中央格停留时间明显增加(p0.01)。与模型组相比,在第4周末,柴大组和柴小组大鼠的各组行为评分均明显降低(p0.01),西药组大鼠的行为状态,活跃程度及情绪反应评分明显下降(p0.01);柴大组和西药组大鼠爬格数及爬行里程数均明显上升,中央格停留时间明显下降(p0.05);柴大组大鼠体重明显增加(p.0.01),柴小组、西药组和补肾组体重未见明显差异。2)神经-内分泌指标:与正常组相比,模型组大鼠下丘脑5-HT、血清NE、C0RT均明显升高(p0.01),Ach明显降低(p0.01)。与模型组相比,柴大组大鼠下丘脑5-HT、血清NE、C0RT均明显降低(p0.01),Ach明显升高(p0.01);柴小组大鼠血清Ach明显升高,NE明显降低;西药组和补肾组大鼠血清NE、E、CORT均明显降低(p0.01)。(2)性腺轴相关指标:与正常组相比,模型组大鼠血中GnRH、LH、T均明显降低(p0.01),PRL、E2明显升高,睾丸重量明显降低,病理损伤评分明显升高(p0.01)。与模型组相比,柴大组大鼠血中 GnRH、LH、T 均明显升高(p0.01 或 p0.05),PRL、E2 明显降低(p0.01),睾丸重量明显升高(p0.01),病理损伤评分明显降低(p0.01);柴小组大鼠血中PRL和E2明显降低(p0.01);西药组大鼠血中LH明显升高(p0.05),PRL和E2明显降低(p0.01或p0.05);补肾组大鼠血中GnRH明显升高,E2明显降低(p0.01或p0.05)。(3)睾丸生化及分子指标:1)与正常组相比,模型组大鼠睾丸线粒体MDA、CytC、8-OHdG均明显升高,SOD明显降低(p0.01或p0.05)。与模型组相比,柴大组大鼠睾丸线粒体MDA、CytC、8-OHdG均明显降低,SOD明显升高(p0.01或p0.05);柴小组大鼠睾丸线粒体MDA明显下降,SOD明显上升(p0.01或p0.05);西药组大鼠睾丸线粒体SOD明显增高(p0.05)。2)与正常组相比,模型组大鼠睾丸PKA、ERK、STAR、Cypllal均明显下降(p0.01或p0.05)。与模型组相比,柴大组大鼠睾丸PKA、ERK、STAR、Cypllal均明显上升(p0.01或p0.05),柴小组大鼠睾丸PKA、STAR明显上升(p0.01),西药组大鼠睾丸ERK、STAR明显升高(p0.05),补肾组大鼠睾丸PKA明显升高(p0.01)。结论:柴胡疏肝散大、小剂量及西药(氟西汀)对束缚肝郁模型大鼠的一般外观行为学均有不同程度的改善作用,其中柴胡疏肝散大剂量改善作用明显,补肾方(五子衍宗丸)的改善作用不明显。柴胡疏肝散大剂量对肝郁模型大鼠性腺轴有较好的调节作用及减轻睾丸的病理损伤,其保护作用可能与减轻线粒体氧化应激损伤和调节睾酮生成信号转导通路有关。补肾方和西药对模型大鼠性腺轴损伤的个别或部分指标有一定的改善作用。该研究结果为揭示中医"疏肝方与肝郁证相关"的科学内涵提供了一定的生物学证据,对认识肝郁证性腺生殖系统的病生理学机制、论证中医辨证论治中方证相关(因证用方)经验的合理性提供了实证依据。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】